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本研究包括三部分：
第一部分：VEGF165和VEGF165b真核表达质粒的构建和鉴定
目的：构建人VEGF165和VEGF165b 真核表达质粒，为研究VEGF165和VEGF165b 蛋白的功能奠定基础。
方法：设计引物，利用RT-PCR 获得VEGF165的cDNA，BamHI和EcoRI 限制性内切酶双酶切后与真核表达载体pcDNA3.0 连接，氨苄青霉素筛选，酶切鉴定和测序鉴定。利用构建好的VEGF165质粒，采取酶切重组的方法构建VEGF165b，氨苄青霉素筛选，酶切鉴定和测序鉴定。
结果：经酶切鉴定和测序鉴定显示，两个重组质粒插入基因片段正确，无突变。
结论：VEGF165和VEGF165b的真核表达质粒构建成功。
第二部分：恩度诱导人肝癌细胞SMMC-7721 抑制性VEGFA选择性剪切异构体VEGF165b的表达及意义
目的：探讨重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin，Endostar，恩度)在人肝癌细胞SMMC-7721中对VEGF165b表达的影响，及上调VEGF165b表达后，SMMC-7721对恩度敏感性的变化。
方法：采用RT-PCR法和Western Blot法，检测恩度干预SMMC-7721 以后VEGF165b的表达变化；稳定转染VEGF165b 真核表达质粒到SMMC-7721，RT-PCR和免疫细胞荧光共聚焦显微镜检测VEGF165b，HIF-1α和下游靶基因VEGFA表达的变化；MTT法检测转染VEGF165b 真核表达质粒与转染空质粒相比，恩度对人肝癌细胞生长的影响。
结果：恩度诱导SMMC-7721的VEGF165b mRNA和蛋白表达上调，而VEGF165b可下调HIF-1α及下游靶基因VEGFA的表达。转染VEGF165b 后，恩度引起SMMC-7721的生长抑制率进一步增加。
结论：恩度抗肿瘤新生血管的作用部分是通过上调VEGF165b 介导的，VEGF165b能增加SMMC-7721细胞对恩度的敏感性，两者治疗肿瘤有协同作用。
第三部分：力比泰通过抑制Sp1 诱导人肝癌细胞VEGFA基因剪切异构体差异性表达
目的：研究力比泰干预人肝癌细胞系HepG2 后Sp1和VEGFA基因的表达状况。
力比泰与VEGF165b 或恩度联合后诱导SMMC-7721细胞生长抑制率的变化以及力比泰对裸鼠移植瘤生长的影响。
方法：RT-PCR，western blot，细胞免疫荧光检测力比泰或betulinic acid 干预HepG2细胞后，Sp1和VEGFA基因表达的变化，MTT法检测联合VEGF165b 或恩度后，Alimta诱导SMMC-7721细胞生长抑制率的变化，及对裸鼠移植瘤模型的治疗作用。
结果：力比泰诱导HepG2的Sp1和VEGFA基因表达下调，并且诱导VEGFA基因的刺激性异构体表达减少和抑制性异构体表达增加。Sp1的特异性抑制剂betulinicacid 也可以诱导出VEGFA基因表达下调并且诱导VEGFA基因的刺激性异构体表达减少和抑制性异构体表达的增加。联合VEGF165b 或者恩度后，Alimta 诱导SMMC-7721细胞生长抑制率增加，抑制裸鼠移植瘤作用增强。
结论：力比泰诱导VEGFA基因的下调和剪切异构体差异性表达是通过抑制Sp1来实现的，Alimta 联合抗肿瘤新生血管蛋白可以增加抗肿瘤疗效。