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目的:
研究负荷CEA-rV的树突状细胞与CIK细胞共培养后在裸鼠体内特异性的抑瘤作用。
研究内容和方法:
第一部分:效应细胞的体外培养与鉴定
一、人脐血来源树突状细胞的培养与鉴定
1、常规无菌采集新鲜脐带血,采用密度.梯度离心法分离出脐血中的单个核细胞,利用贴壁法去除悬浮细胞后,向贴壁细胞中加入细胞因子rhGM-CSF、 rhIL-4和rhTNF-α,定向诱导成树突状细胞。
2、用倒置显微镜观察所培养的细胞,并经扫描电镜与透射电镜从形态上进一步证实,利用流式细胞技术从表型上鉴定所培养的细胞。
二、人脐血来源CIK细胞的培养与鉴定
1、常规无菌采集新鲜脐带血,采用密度.梯度离心法分离出脐血中的单个核细胞,利用贴壁法去除贴壁细胞后,向悬浮细胞中加入细胞因子rhIFN-γ、rhIL-1 β、rhIL-2和CD3mAb,定向诱导成CIK细胞。
2、用倒置显微镜观察所培养的细胞,利用流式细胞技术从表型上鉴定所培养的细胞。
三、CEA-rV负荷DC细胞的研究
1、CEA-rV的制备及滴度的测定。
2、CEA-rV负荷DC细胞。
3、采用免疫组化技术确认DC摄取CEA抗原的效果。
第二部分:CEA-rV负荷DC与CIK细胞共培养后对CEA阳性肿瘤的特异性治疗作用
1、采用免疫组化技术筛选CEA抗原表达阳性的肿瘤细胞株。
2、48只裸鼠,分为8组,其中4组在裸鼠颈背部皮下接种CEA阳性结肠癌细胞株Lovo,另外4组在颈背部皮下接种CEA阴性肝癌细胞株Bel-7402。次日,接种后的Balb/c裸鼠再随机分为生理盐水对照组、CIK组、DC-CIK组和CEA-rV-DC-CIK组,连续6天在接种肿瘤的局部注射相应的效应细胞或生理盐水。
3、实验结束时,完整剥离各组裸鼠所形成的肿瘤并称取瘤重,将肿瘤组织常规固定于福尔马林溶液中,石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察。
结论:
1、可以从脐血中成功诱导出具有典型形态和免疫表型的DC和CIK细胞。
2、CIK细胞、与DC共培养的CIK细胞以及与荷CEA-rV的DC共培养后的CIK细胞均能有效抑制荷Lovo结肠癌细胞株及。Bel-7402肝癌细胞株裸鼠肿瘤的生长。
3、负荷CEA-rV的DC与CIK细胞共培养后在裸鼠体内对CEA阳性肿瘤有特异性抑制作用。