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固定金属离子亲和色谱法因操作过程简单方便等优点，近年来在磷酸化蛋白/肽分离富集中应用广泛。本文利用固定金属离子亲和色谱这一样品前处理方法，开展磷酸化肽富集的研究，开发了多种低丰度磷酸化肽的富集技术，对于提升磷酸化肽富集和磷酸化位点的研究技术，具有积极的促进作用。 本文设计并合成了甲基丙烯酸缩水甘油酯-乙氧化三羟甲基丙烷三丙烯酸酯(GMA-SR454)聚合物，将其作为基底进行了亚氨基二乙酸(IDA)及Fe3+修饰，制各了GMA-SR454/IDA-Fe(Ⅲ)材料，用于磷酸化肽的选择性富集。可使β-酪蛋白酶解液中磷酸化肽的检出限达到1.6 fmol，富集选择性也有所提升。该材料对人血清中磷酸化肽的富集效果也令人满意，经富集后4条单磷酸化肽段均能被检测到。 为进一步提高磷酸化肽的覆盖率，本文提出除盐结合固定金属离子亲和色谱法用于分离富集磷酸化肽的新思路，除盐材料选择C18吸附材料和铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料，富集材料采用GMA-SR454/IDA-Fe(Ⅲ)材料。结果表明，由于铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料的金属离子亲和色谱特性，相比C18吸附材料，有更好的除盐效果，β-酪蛋白酶解液中肽段的检测数目可提高0.4倍。当该技术与富集材料串联时也能取得良好的磷酸化多肽富集效果，能检测到的磷酸化肽段数目和肽段种类明显增加，磷酸化肽段覆盖率增加33.3％。 本文探究了新型固定化基质的制备方法，以获得更好的磷酸化肽质谱检测结果。利用物理法和化学法制备了以滤纸为载体的2，5-二羟基苯甲酸（2，5-DHB）和9-吖啶胺固定化基质，然后在滤纸表面构建亲水的微孔阵列，用于后续的质谱检测。结果发现，物理法制备的固定化9-吖啶胺基质性能优良，对6种有机小分子进行检测，与传统的基质溶液点样法相比，分辨率提高2.2～6.5倍。该方法不仅简便了质谱检测过程，减少了基质的浪费，还可提高检测分辨率。