【摘 要】
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双特异性抗体因其能够识别两个抗原表位极大地增加了抗体的效价而成为了抗体药物领域的研发热点,但其结构设计和制备过程相较于单克隆抗体复杂性大幅增加,其生产与应用受到一定程度限制。课题组前期将抗Ig G Fc抗体（αFc）键合在胺化聚苯乙烯纳米粒上而构建出通用型抗体固定平台（称之为“纳米适配子”）,该体系通过αFc的Fab段识别和结合两种单克隆抗体药物的保守Fc结构域而形成双特异性纳米抗体。纳米适配子技
【基金项目】
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科技部重点研发项目； 国家自然科学基金委员会；
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双特异性抗体因其能够识别两个抗原表位极大地增加了抗体的效价而成为了抗体药物领域的研发热点,但其结构设计和制备过程相较于单克隆抗体复杂性大幅增加,其生产与应用受到一定程度限制。课题组前期将抗Ig G Fc抗体（αFc）键合在胺化聚苯乙烯纳米粒上而构建出通用型抗体固定平台（称之为“纳米适配子”）,该体系通过αFc的Fab段识别和结合两种单克隆抗体药物的保守Fc结构域而形成双特异性纳米抗体。纳米适配子技术实现了双特异性抗体的便捷和可控制备,赋予单克隆抗体药物高效化。然而,将αFc键合于纳米粒表面的过程较复杂、质量控制难度大。课题提出利用Fcγ受体I型蛋白（Fcγreceptor I/CD64,FcγRI）和血清白蛋白（Serum albumin,SA）重组而成的融合蛋白（FcγRI-SA）,与高分子材料聚乳酸组建融合蛋白复合型纳米适配子。在本研究中,对表达FcγRI-白蛋白融合蛋白的重组毕赤酵母工程菌进行检测、鉴定,优化目标蛋白发酵条件,对目标蛋白进行表征及功能研究。本课题首先构建了表达鼠源FcγRI（Mouse Fcγreceptor I,m FcγRI）-血清白蛋白（Mouse serum albumin,MSA）融合蛋白的工程菌种子库,通过绘制生长曲线对其生长特性进行了检验;通过检测不同培养基培养条件下主种子和工作种子的生长状态、细胞形态、表型、目的基因整合情况等,明确了表达m FcγRI-MSA融合蛋白工程菌具备毕赤酵母菌属的生长繁殖特征,证实95%以上的种子批均整合有目的基因片段;通过优化工程酵母菌的发酵条件,优选出高效、稳定生产目标蛋白的方案;以三批次m FcγRI-MSA融合蛋白为研究对象,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱、紫外-可见分光光度法、毛细管电泳等电聚焦-全柱成像检测、高效液相色谱等方法对目标蛋白的基础理化性质、一级结构序列及杂质残留等特性进行了鉴定;证明了m FcγRI-MSA结合单克隆抗体药物效能高;同时,还证明了基于m FcγRI-MSA和生物医用高分子材料构建的融合蛋白复合型纳米适配子可用于双特异性抗体的构建。本研究初步证明FcγRI-白蛋白融合蛋白可以用于构建通用型抗体固定平台,为纳米适配子的临床前试验和药物开发奠定了基础。
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