【摘 要】
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背景和目的原发性肝癌(Primary Liver Cancer,PLC)早期不易被发现,然而肿瘤可以刺激机体产生相应的肿瘤标记物,通过检测这些新标记物可以发现和诊断PLC。用分子生物学和免疫
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背景和目的原发性肝癌(Primary Liver Cancer,PLC)早期不易被发现,然而肿瘤可以刺激机体产生相应的肿瘤标记物,通过检测这些新标记物可以发现和诊断PLC。用分子生物学和免疫学方法筛选和鉴定这些新产生的标记物,可能会为敏感、特异的诊断早期肿瘤提供新的思路。PLC发生后机体产生各种新的生物标记,目前临床上实验室诊断肝癌最常用的是甲胎蛋白(AFP),但其敏感性只有大约70%,在良性肝病中血清AFP也有增高现象。临床上急需寻找新的特异性更高的肿瘤标记物。噬菌体展示肽库技术是一种用于筛选蛋白、多肽的强有力的生物技术,它的基本原理是将外源蛋白通过与噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性。在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的短肽,通过与特定的靶标反应,使展示特定蛋白的噬菌体从表达有各种外源性蛋白的噬菌体肽库中筛选出来,然后进行序列测定,获得相应的结构和功能信息。我们运用噬菌体随机肽库筛选PLC患者的血清,获得特异性多肽,期望为PLC的诊断和判断预后提供新的标记物。方法1.先通过将噬菌体与正常血清预吸附,然后未结合的噬菌体再与肝癌血清进行吸附,得到与肝癌患者血清结合的噬菌体扩增后,重复筛选三次,获得特异性噬菌体。2.挑取单个噬菌斑,通过ELISA方法检测与血清的结合情况,最终得到能够与肝癌血清特异性结合的单个噬菌体克隆。3.提取单个噬菌体克隆通过引物-96Ⅲ测序,并根据短肽插入位点和氨基酸遗传密码表得到插入短肽序列。结果经过三轮筛选,噬菌体得率提高约100倍,挑取单个噬菌体反复鉴定后得到三个特异性最好的噬菌体株,有可能做为肝癌诊断的有用标记物。结论本实验通过噬菌体展示库筛选出能与肝癌血清特异性结合的噬菌体短肽,可能为肝癌早期诊断、联合检测提供候选标记物,并有可能为肝癌的导向治疗打下基础。
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