原生质体诱变及抗性选育L-组氨酸产生菌

来源 :湖北工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chubiao5201314
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文以谷氨酸棒杆菌S9114(Corynebacterium glutamicum S9114)为出发菌株,根据发酵代谢调控理论进行诱变选育L-组氨酸产生菌。主要研究内容和结果如下: ①确立了定量分析发酵液中L-组氨酸的“Paully标准加入法”。以经硫酸锌预处理(以锌离子屏蔽L广组氨酸咪唑基的PauUy反应)的谷氨酸棒杆菌S914发酵液为空白,以Paullv法绘制标准加入曲线,其线性回归方程:y=12.036x+0.0075,相关系数:R2=0.9989。该法可减小发酵液中钙离子、镁离子、氨离子等对Paully法的干扰,且保持了Paullv法定量分析L-组氨酸简单、快速的优点; ②以浊度法测定菌悬液浓度。结合平板菌落计数,以生理盐水为空白,在620nm波长绘制菌悬液浓度标准曲线,其线性回归方程:y=0.3448x一0.0043,相关系数R2=0.9992;同时确定了前培养周期为12h、种子培养周期为12h; ③以谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株,经亚硝酸钠诱变、6-巯基嘌呤平板初筛,选育出一株L-组氨酸产生菌Y1,该菌株可积累L组氨酸248mg/L;谷氨酸棒杆菌S9114经紫外线与氯化锂复合诱变、6.巯基嘌呤平板初筛,选育出一株L-组氨酸产生菌LF11,该菌株可积累L-组氨酸257mg/L; ④以含2%甘氨酸的液体完全培养基将谷氨酸棒杆菌LFll预培养至对数生长期、6.7U/mL青霉素钠预处理2h、2000U/ml,蛋清溶菌酶处理12h,原生质体制备率为98.90%:以含0.5mol/L蔗糖的等渗完全培养基平板再生,再生率为10.67%; ⑤根据浅盘发酵的原理自行设计出双层平皿初筛。与摇瓶发酵复筛相比,前者耗时少、培养基用量少;经对比,突变株L广组氨酸积累能力排序的平皿初筛与摇瓶复筛结果相吻合,且在平皿初筛中也未见染菌现象; ⑥原生质体的制备和再生有诱变效应。以谷氨酸棒杆菌LFll为出发菌株,经再生诱变,筛选低浓度6-巯基嘌呤、D-组氨酸、4-硫尿嘧啶抗性突变株,得到菌株LYl,该菌株可积累L组氨酸265mg/L: ⑦以谷氨酸棒杆菌LFll为出发菌株制备原生质体并进行多次诱变,逐级引入并筛选高浓度6-巯基嘌呤(MP)、D-组氨酸(DH)、4.硫尿嘧啶(4-AU)和1,2,4.三噻唑-3-丙氨酸(TRA)抗性突变株,最终选育出一株L-组氨酸产生菌UN26221(Mpr+DHr+4-Aur+TRAr),该菌株在未经发酵条件优化时可积累L-组氨酸2093mg/L
其他文献
侧面柱撞是Euro-NCAP新车评价规程中重点考核项目,本文基于Euro-NCAP(2014版)侧面柱撞评价规程对某车型的侧面柱撞进行了车体结构和约束系统性能全面评估,针对试验过程中假人
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种人畜共患传染病,感染的患者主要表现出波状热、乏力、肌肉/关节疼痛、肝脾肿大、生殖系统发育不全和严重的炎症反应等。该病流行
高效吸收碰撞能量和有效保护乘员的生存空间是正面碰撞的基本要求.文章通过变形空间推导了正面碰撞等效目标波形的设计公式,给出了G-S到G-T曲线的转换方法,用约束系统模型验
链霉菌作为一种典型的土壤细菌,在生长和生理代谢中常常需要面对不同的生长环境和生存压力,长期的进化过程形成了一套完整的形态分化和代谢机制,天蓝色链霉菌能够产生十一烷基灵
汽车正面碰撞形式的多样性,对车辆正面车身结构提出了不同的耐撞性要求.本文通过对多款车型碰撞试验数据曲线的深入分析与计算,提取并定义了可以表征车辆正面结构抗撞性能指
由浙江电视台教育科技频道创意发起,2001年起升格为由教育部主办、浙江广电集团承办的电视活动“五月的鲜花”,已经成长为全国大学生校园电视文艺直播活动的盛典.
高职院校教育主要目的是培养社会实用性人才,艺术设计专业教学中也应当强调以学生的就业为主要导向,从教育目标、课程设计和教学方法等方面入手,实施教学改革和创新,从而促使
本文对某车型侧面AE-MDB碰撞工况进行仿真分析优化研究.对MDB和AE-MDB两种移动壁障及作用工况进行比较分析,通过针对某车型进行仿真分析,进一步明确两种壁障碰撞结果的区别.
本篇论文主要目的为研制77GHz前视汽车防撞雷达警示系统.本雷达系统整合77GHz天线、自我研发之65nm CMOS制程射频电路及讯号处理器等关键技术;具有前方警示之功能,可于行进中
超氧化物歧化酶(简称SOD)是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶,按金属辅基的不同可分为CuZn.SOD,Mn-SOD,Fe-SOD和Ni-SOD。铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)是一种重要的