论文部分内容阅读
胃癌是最常见的肿瘤之一，其死亡率在肿瘤中位居第二。尽管关于胃癌的诊断方法和治疗药物的研究非常广泛，晚期的胃癌患者仍具有不良的预后以及较差的生活质量，其治疗方法依然只是依赖于传统的细胞毒性化疗。研究证明，肿瘤微环境在塑造肿瘤成型及肿瘤演化中的作用越来越重要。肿瘤微环境由多种成分组成，包括细胞器，肿瘤克隆群，基质细胞如上皮细胞，成纤维细胞，血管上皮细胞，以及多种固有性和适应性免疫细胞。胃癌实体瘤中的细胞除了有癌细胞外，还包含肿瘤微环境中固有成分及迁移进来的细胞。肿瘤微环境中的各个免疫细胞间的调控，对胃癌的进程有着重要的影响，这些免疫细胞很有可能成为未来胃癌治疗的靶点。肥大细胞来源于骨髓，在骨髓中作为未成熟的祖细胞迁移到外周组织则分化为成熟细胞。先前的研究表明，肥大细胞在变态反应及病原体感染免疫应答中发挥重要生物学作用。最新的研究表明，肥大细胞被认为是肿瘤微环境的调控因子，它主要可以通过以下几个方面影响肿瘤的进程，首先，肥大细胞与血管生成关系密切，通过分泌促血管生成因子或与其他细胞相互作用来促进血管生成从而促进肿瘤生长；其次肥大细胞可以促进组织内重塑促进肿瘤的生长和转移；再次，肥大细胞通过免疫调节影响肿瘤生长。但是，在人类肿瘤微环境中肥大细胞到底是发挥怎样的作用，促肿瘤还是抑制肿瘤的作用，需要我们进一步研究。尽管越来越多的研究证据表明肥大细胞在肿瘤中侵润增加，其功能机制的研究还在探索中，其在肿瘤微环境中的准确的作用还不完全知道。在胃癌中，肥大细胞的分布、表型以及功能至今尚未明确，亟待研究。目的1.明确肥大细胞在胃癌中的分布；2.研究肥大细胞在胃癌中的表型特征和趋化因子受体的表达3.初步探讨肥大细胞在胃癌中的免疫抑制功能。方法1.肥大细胞在胃癌中的分布及表型检测在重庆西南医院普外科收集胃癌病人新鲜外周血和胃癌组织标本。采用流式细胞术，检测肥大细胞的分布情况。运用免疫组化染色检测肥大细胞的原位分布。H&E染色明确胃组织病理学情况。流式细胞术分析MC细胞表型。2.肥大细胞在胃癌中的表型特征和趋化因子受体的表达采用流式细胞术检测胃癌中肥大细胞共刺激分子CD80、CD86和HLA-DR的表达，并筛选趋化因子受体。3.肥大细胞系(HMC-1)与胃癌细胞系共培养及炎性细胞因子检测将HMC-1细胞和BGC-823细胞按1:1的比例,或单独加BGC-823细胞，或单独加HMC-1细胞，收集培养上清，ELISA检测IL-6及TNF-ɑ蛋白水平。4. HMC-1细胞对人CD3+T细胞的增殖的调控作用分别用胃癌组织培养上清、正常胃组织培养上清、胃细胞系培养(AGS)上清及胃上皮细胞系(GES-1)培养上清，刺激HMC-1细胞使成为条件性HMC-1细胞，磁珠分选正常人外周血CD3+T细胞，并CSFE标记，与刺激后的HMC-1细胞共培养，分别在5天后，收集细胞并上流式细胞仪检测，分析T细胞的增殖情况。结果1.肥大细胞在胃癌中的分布1.1胃癌患者和健康人外周血肥大细胞的比例分别为0.892%、1.22%，经统计学分析胃癌患者外周血中肥大细胞的百分比与正常人外周血的相比无明显差异（P>0.05）。肥大细胞在胃癌组织、癌旁组织及正常组织中占CD45+细胞的比例分别为14.39%，11.77%和11.81%；经分析胃癌组织中的肥大细胞的百分比较癌旁组织和正常组织显著增高(P<0.05)。1.2免疫组化结果显示，相比于正常组织肥大细胞在胃癌组织中明显浸润。上述结果提示，肥大细胞在胃癌微环境中浸润增高。2.胃癌中肥大细胞表型特征和趋化因子受体表达情况2.1胃癌组织中浸润的肥大细胞较其他组织表达共刺激分子CD80，CD86无明显差异，但高表达HLA-DR。这提示胃癌组织中的肥大可能具有免疫抑制表型。2.2胃癌组织中的肥大细胞几乎不表达趋化因子受体CCR2，CXCR2，CXCR3，但高表达CXCR4。而癌旁组织和非肿瘤正常组织表达CXCR4的肥大细胞显著降低。3. HMC-1细胞对胃癌细胞系分泌炎性因子的影响在肥大细胞系HMC-1和胃癌细胞系BGC-823细胞共培养体系中，单独培养BGC-823则有较多IL-6，TNF-ɑ分泌，而在BGC-823细胞培养过程中加HMC-1细胞后，TNF-ɑ、IL-6蛋白水平明显降低（P<0.05）；说明肥大细胞能抑制胃癌肿瘤细胞的促炎症作用，间接说明肥大细胞具有一定的免疫抑制功能。4. HMC-1细胞对CD3+T细胞的增殖的调控作用肿瘤组织培养上清，胃癌肿瘤细胞系培养上清刺激后的HMC-1细胞相比正常组织培养上清，胃正常细胞系培养上清，能明显抑制CD3+T细胞的增殖。结论1.肥大细胞在胃癌组织中侵润增加，并具有免疫抑制表型。2.胃癌组织中的肥大细胞高表达CXCR4。3. HMC-1抑制胃癌肿瘤细胞系的促炎作用。4.条件性的HMC-1抑制CD3+T细胞的增殖。