HMGB1、RAGE、NF-KB在小鼠急性肝衰竭中表达的研究

• 作 者: 危敏
• 机 构: 贵阳医学院
• 出 处: 贵阳医学院
• 发表日期: 2014年期
• 关键词: 急性肝衰竭 发病机制 核转录因子 谷丙转氨酶 免疫组化

目的：观察D-氨基半乳糖(D-GaIN)及脂多糖(LPS)致小鼠急性肝衰竭发生过程中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、晚期糖基化终末产物受体（RAGE)、核转录因子（NF-KB）在小鼠肝脏的表达变化，探讨HMGB1介导的RAGE/NF-KB信号通路在急性肝衰竭发病机制中可能的作用。　　方法：雄性昆明种小鼠64只，随机分为正常对照4小时、8小时、12小时、24小时组，急性肝衰竭模型4小时、8小时、12小时、24小时组。腹腔同时注射D-Galn500mg/Kg、LPS10ug/Kg制备急性肝衰竭模型，分别在造模4小时、8小时、12小时、24小时末处死小鼠，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素（TBIL）的含量，观察肝组织学改变，免疫组化SABC法检测正常4小时、8小时、12小时、24小时组及相应肝衰竭组小鼠肝组织中HMGB1、RAGE、NF-KBp65的表达情况，并用实时荧光定量PCR（Real time-PCR）的方法测定正常4小时、8小时、12小时、24小时组及相应肝衰竭组小鼠肝组织中HMGB1、RAGE、NF-KBp65的mRNA表达水平变化。　　结果：急性肝衰竭模型组小鼠血清ALT和AST含量均显著高于相应正常对照组小鼠，且急性肝衰竭模型8小时、12小时、24小时组小鼠血清TBIL含量显著高于相应正常对照。病理学观察，急性肝衰竭4小时组小鼠肝脏肝细胞轻度肿胀、嗜酸性变、炎细胞浸润,可见核内包涵体，肝细胞呈点状坏死，急性肝衰竭8小时组小鼠肝脏中肝细胞呈桥接坏死，急性肝衰竭12小时组小鼠肝脏中肝细胞片状坏死融合，核溶解、碎裂，汇管区及肝细胞间见较多炎细胞浸润伴少量出血，急性肝衰竭24小时组肝细胞坏死更加明显，大片状坏死和少量出血，仅少量肝细胞残存，散在分布，纤维网状支架塌陷。免疫组化显示，急性肝衰竭模型组小鼠肝组织中HMGB1主要表达在肝细胞胞浆和肝细胞坏死区，HMGB1阳性表达量较相应正常对照组显著增加，且随肝衰竭发展表达明显增加。急性肝衰竭模型组小鼠肝组织中RAGE主要表达在炎细胞浸润区和肝细胞坏死区，RAGE阳性表达量较相应正常对照组显著增加。急性肝衰竭模型组小鼠肝组织中NF-κBp65主要表达在炎细胞浸润区和肝细胞胞浆。NF-κBp65阳性表达量较相应正常对照组显著增加，且随肝衰竭发展明显增加。Realtime-PCR检测结果显示，急性肝衰竭模型组小鼠肝组织HMGB1mRNA表达量显著高于相应正常对照组，且随肝衰竭发展增加。急性肝衰竭模型组小鼠肝组织RAGEmRNA表达量显著高于相应正常对照组，且随肝衰竭发展升高。急性肝衰竭模型组小鼠肝组织 NF-κBp65mRNA表达量显著高于相应正常对照组，且随肝衰竭发展增加。　　结论：D-Galn及LPS诱导的小鼠急性肝衰竭发生过程中过程中小鼠肝脏 HMGB1、RAGE、NF-KBp65的表达水平有明显的改变，且随着肝衰竭进展而呈逐渐升高趋势，提示肝脏 HMGB1可能通过介导RAGE、NF-KBp65而参与了小鼠急性肝衰竭的发生发展。