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第一部分，防腐剂BAC对兔角膜上皮屏障功能的急性影响
目的:上皮屏障功能是角膜抵御外界刺激的第一道屏障，BAC是目前滴眼液中最常用的防腐剂，长期使用对眼表有一定的毒性作用，本研究旨在探讨短期使用BAC对兔角膜上皮屏障功能的影响。
方法:新西兰大白兔右眼滴用BAC，左眼作为阴性对照。实验分4组:PBS组、0.005％BAC组、0.01％BAC组及0.02％BAC组。每只眼点3次，每次间隔5分钟。临床检测Schirmer、BUT、荧光素染色和孟加拉玫瑰红染色。IVCM评价中央角膜的形态学变化。TER检测评价BAC对角膜屏障功能的影响。角膜上皮铺片免疫荧光染色检测ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin-1及Ki67的表达，研究BAC对角膜上皮紧密连接蛋白及细胞增殖的影响。Tunel方法评价BAC对角膜上皮细胞凋亡的作用。Westernblot分析和RT-PCR研究角膜上皮细胞ZO-1表达量的变化。
结果:各浓度BAC组Schirmer、BUT检测与阴性对照组没有明显差异;角膜荧光素染色为阴性;孟加拉玫瑰红染色阳性，呈片状或团块状。IVCM检测显示BAC诱导角膜上皮表层细胞的结构破坏，而角膜上皮基底层细胞和角膜内皮细胞的形态没有明显的影响。BAC引起角膜TER下降，导致ZO-1和ZO-2分布不连续，而对Occludin和Claudin-1的染色没有明显影响。Westernblot分析和RT-PCR显示，各浓度BAC对ZO-1的mRNA和蛋白表达量都没有影响。
结论:短期滴用BAC破坏兔角膜上皮细胞屏障功能，是BAC引起药物毒性眼表病变的新的作用机理，值得进一步研究。
第二部分，SA3K抑制TNF-α诱导的兔角膜内皮细胞屏障功能的破坏
目的:角膜内皮屏障功能防止房水中成分通过旁细胞通路渗入基质，对维持角膜基质的相对脱水状态，保持角膜的透明性具有非常重要的作用。多种眼内疾病可引起房水中TNF-α浓度增加，导致角膜内皮屏障功能破坏。SA3K是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，能够上调紧密连接蛋白occludin的表达，减少血管渗漏。本研究旨在探讨SA3K对TNF-α诱导的兔角膜内皮细胞屏障功能的保护作用。
方法:取新西兰大白兔角膜进行组织块培养，实验分4组:阴性对照组，TNF-α组，TNF-α+低浓度SA3K组，TNF-α+高浓度SA3K组，37℃培养24小时。通过检测角膜内皮对FITC-右旋糖酐的渗透来评价角膜内皮屏障功能。角膜组织铺片免疫荧光方法检测紧密连接蛋白ZO-1、粘着连接蛋白VE-cadherin、纤维肌动蛋白和微管结构蛋白的形态和分布，Westernblot分析和RT-PCR检测ZO-1、VE-cadherin、MLC及p-MLC等蛋白表达量的变化。
结果:TNF-α剂量依赖性地诱导角膜内皮对FITC-右旋糖酐的渗透性增加，同时加入SA3K抑制TNF-α对角膜内皮屏障功能的破坏，单独加入SA3K对角膜内皮细胞的渗透性没有影响。TNF-α诱导紧密连接蛋白ZO-1和粘着连接蛋白VE-cadherin的分布紊乱、F-actin和microtubule的结果破坏，而对ZO-1和VE-cadherin的mRNA和蛋白表达量都没有影响，SA3K(200nM)完全抑制TNF-α对角膜内皮屏障结构的破坏作用。Westernblot分析显示，SA3K抑制TNF-α诱导的p-MLC的增加，而对总MLC的表达量没有影响。
结论:SA3K抑制MLC的激活、维持角膜内皮屏障结构和功能的完整性，减少TNF-α的破坏作用，可能具有重要的临床应用价值。