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目的:建立激素耐药型原发性肾病综合征(SRNS)儿童、激素敏感型原发性肾病综合征(SSNS)儿童与正常儿童尿液全蛋白双向凝胶电泳图谱,分析差异的蛋白质位点,为研究原发性肾病综合征糖皮质激素耐药的机制提供依据。
方法:研究对象共20例,其中SSNS(治疗前)5例、SSNS(治疗后)5例、SRNS 5例、正常对照组5例,提取各组尿液全蛋白,利用双向凝胶电泳技术(2-DE),建立尿液全蛋白凝胶图谱。应用投射扫描仪对染色后的胶图进行扫描,利用Image Master 2D V3.01分析软件进行凝胶图像分析。
结果:测得SRNS组尿液2.DE凝胶的平均检测点为206+8个,SSNS组(治疗前)组尿液2.DE凝胶的平均检测点是204+5个,SSNS组(治疗后)尿液2-DE凝胶的平均检测点是55+5个,正常对照组凝胶的平均检测点是105+7个。SRNS组与SSNS组(治疗前)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点66个,其中4个蛋白质点表达上调、11个蛋白质点表达下调、51个蛋白质点表达"全"或"无";SRNS组与SSNS组(治疗后)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点33个,其中2个蛋白质点表达下调、31个蛋白质点表达"全"或"无";SSNS组(治疗前)与SSNS组(治疗后)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点65个,均表达"全"或"无";SSNS组(治疗后)与正常对照组尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点75个,其中1个蛋白质点表达上调、13个蛋白质点表达下调、61个蛋白质点表达“全”或“无”。
结论：本研究成功建立了分辨率高且重复性较好的SRNS儿童、SSNS儿童及正常儿童尿液全蛋白的2一DE图谱；通过各组问尿液2-DE图谱分析，获得了一些有价值的信息，包括：①SRNS与SSNS患儿的尿液蛋白谱之间存在量与质的差异；②发现了一些可能与INS激素耐药有关的差异蛋白位点；③发现了一些与INS激素敏感有关的蛋白质位点。本研究结果为进一步运用蛋白质组质谱技术从这些差异蛋白质位点中寻找与INS激素耐药抑或激素敏感相关的蛋白质打下了基础。