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目的:恶性黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,其对常规化疗药物的耐药性严重影响其预后,因而逆转肿瘤细胞的耐药性,以提高化疗疗效,是治疗恶性黑素瘤的重要课题。目前认为恶性黑素瘤耐药的主要机制是凋亡抑制,越来越多研究证实特异性下调某些凋亡抑制基因以促进肿瘤细胞凋亡,可以增加恶性黑素瘤对化疗药物的敏感性。WT1基因最早发现作为一种抑癌基因参与Wilm’s瘤的发生,近年来研究证实WT1基因在多种实体瘤细胞中高表达,具有抑制肿瘤细胞凋亡作用,发挥癌基因的作用。国外研究发现WT1基因在80%以上恶性黑素瘤中表达,而在良性色素痣和正常皮肤中未见表达,下调WT1基因可以抑制恶性黑素瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。但抑制WT1基因表达能否逆转恶性黑素瘤细胞的耐药性尚未见报道。RNA干扰技术是近年来发展起来的基因沉默新技术,能高效,特异地抑制目的基因的表达,因此很快成为研究基因功能的重要工具。本研究旨在探讨利用RNA干扰沉默WT1基因对人转移性恶性黑素瘤WM451细胞生长,凋亡及其对顺铂敏感性的影响,为恶性黑素瘤的基因治疗提供理论依据。方法:1.构建针对WT1基因的siRNA真核表达载体;2.利用脂质体将siRNA真核表达载体转入恶性黑素瘤WM451细胞中,并检测转染效率;3.利用RT-PCR、Western-Blot及免疫细胞化学染色方法检测WM451细胞中WT1基因mRNA及蛋白水平的表达,测定基因沉默效果;4.用MTT法测定WM451细胞生长曲线;5.电镜下观察细胞凋亡形态;6.用MTT法检测WM451细胞对化疗药物的敏感性。结果:1.成功构建靶向WT1基因的siRNA真核表达载体;2.RT-PCR检测显示WT1基因在恶性黑素瘤WM451细胞中高表达;3.利用脂质体为载体将siRNA真核表达载体转染WM451细胞,转染率为73%,转染后细胞中WT1mRNA表达水平下降67%,蛋白表达水平下降67%;4.RNA干扰沉默WT1基因可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡;5.电镜下可以看到凋亡细胞微绒毛减少,细胞核固缩,染色体边集;6.siRNA实验组细胞IC50从9.37ug/ml降至4.13ug/ml,逆转倍数2.29, siRNA实验组WM451细胞对顺铂的敏感性增加。结论:1.靶向WT1的序列特异性siRNA可显著抑制WT1基因的表达;2.下调WM451细胞WT1基因表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡;3.RNA干扰靶向沉默WT1可增加WM451细胞对顺铂的敏感性,RNA干扰技术为恶性黑素瘤的治疗提供了新途径。