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目的：
骨髓增殖性疾病(MPD)是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。经典MPD主要包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、特发性骨髓纤维化(IMF)和慢性粒细胞白血病(CML)。尽管临床上MPD的诊断有严格标准,但目前尚缺乏诊断的“金标准”和治疗的最佳方案。只有CML确定了特异的分子标记-BCR-ABL融合基因,而其它亚型是如何发生细胞过度增殖的原因仍不十分清楚。近年来,围外相继报道在费城染色体阴性的MPD患者,尤其是PV患者中广泛存在JAK2 V617F点突变,并将其列入MPD的诊断标准之一。然而,我国在这方面的研究还处于起步阶段。本研究旨在探索建立能稳定、灵敏、简便检测JAK2 V617F突变的临床诊断方法,初步调查JAK2 V617F突变在我院相关血液病中的分布情况,并探讨MPD患者中JAK2 V617F突变的临床意义。
方法
收集2006年10月至2008年3月114例血液病患者和10例健康人全血标本,其中MPD患者47例(PV 8例,ET 12例,IMF 3例,CML20例,HES 3例,CNL 1例),提取全血基因组DNA,应用ARMS对JAK2 V617F突变进行分析,3％琼脂糖凝胶电泳检测结果,并将PCR产物进行基因测序鉴定。同时利用不同梯度的阳性对照质粒为模板,对ARMS检测JAK2 V617F突变灵敏性进行分析。
结果
1.成功建立稳定、特异检测JAK2 V617F突变的ARMS方法,灵敏性为2％。
2.47例MPD患者中有20例检测出JAK2 V617F突变,其余血液病患者及健康人均末发现存在有JAK2 V617F突变,20例JAK2 V617F阳性标本中PV 8例(100％)、ET 8例(66.7％)、IMF 2例(66.7％)、HES1例(33.3％)、CNL 1例(100％)。除CML外,对MPD的各亚型澡JAK2 V617F突变的发生率进行比较,发现差异无统计学意义。
结论
1.ARMS方法检测骨髓JAK2 V617F突变具有很好的特异性和灵敏性,可作为临床筛查的检测方法。
2.JAK2 V617F突变只存在除CML外的MPD患者中,尤其以PV患者中发生率最高,提示发生率并不因人种的不同存在差异。
3.JAK2 V617F突变可作为PV鉴别诊断的标志,但无助于BCR-ABL融合基因阴性的MPD精确分类。