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目的:通过单独及联合应用选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布和5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiareticacid,NDGA)处理体外培养的人结肠癌细胞株HT-29,观察药物对细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。
方法:HT-29细胞常规培养,取对数生长期细胞进行实验。用不同浓度塞来昔布及NDGA处理HT-29细胞,应用甲基偶氮唑蓝(thiazolylbluetetrazliumbromide,MTT)法检测细胞生长增殖情况;用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;用AnnexinV/PI法检测凋亡;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HT-29细胞Caspase-3mRNA变化,研究塞来昔布及NDGA对HT-29细胞诱导凋亡的影响和可能的机制。
结果:1、MTT法显示塞来昔布和NDGA均可以抑制HT-29细胞生长,随着浓度和时间的增加,其抑制率呈上升趋势,两种药物的联合应用较同等剂量的药物单独应用效果明显。2、倒置相差显微镜下可以看到塞来昔布及NDGA都能使体外培养的结肠癌HT-29细胞的形态发生明显变化,而两种药物联合应用后细胞变化更明显。3、激光共聚焦显微镜下可以看到应用塞来昔布及NDGA后可以引起HT-29细胞凋亡。4、RT-PCR检测药物作用后Caspase-3的变化,可以发现药物作用后Caspase-3表达上调,两种药物联合应用后上调最多。
结论:单独应用塞来昔布和MDGA均可以抑制体外培养的HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡,而联合应该效果优于单独应用,其抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与激活Caspase-3途径有关。