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目的:
通过观察卡介苗(BCG)对哮喘儿童外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)的表面标志、刺激淋巴细胞增殖功能及分泌细胞因子的影响,并与变应原特异性免疫治疗(ASIT)作比较,分析BCG对哮喘患儿PBMC来源的DC成熟及免疫功能的影响。
方法:
采集哮喘急性发作期患儿静脉血,随机分为BCG干预组和哮喘组,并采集ASIT治疗后的哮喘患儿和正常儿童的静脉血作为ASIT对照组和正常对照组,分离出外周血单个核细胞(PBMCs),贴壁培养获得外周血单核细胞(peripheral blood monocytes,PB-Mon),rhGM-CSF、rhIL-4联合诱导单核细胞分化生成未成熟树突状细胞,培养第6天开始加入TNF-α诱导成熟,BCG干预组在培养的第7天加入BCG刺激,在倒置显微镜下连续观察DC的形态学变化,通过收集培养第9天DCs,流式细胞术检测DCs表面标志物HLA-DR、CD80、CD83、CD86及CD1a的表达率,MTT法检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法测定DC培养上清中IL-10、IL-12的分泌水平,分析BCG在体外对哮喘患儿外周血单个核细胞来源的DC成熟程度及免疫功能的影响。
结果:
(1)PBMCs贴壁培养获得的外周血单核细胞在rhGM-CSF、rhlL-4、rhTNF-α协同诱导作用下,分化成为形态上具有典型树突状突起的DCs;(2)正常对照组、BCG干预组和ASIT对照组DCs表达CD80、CD83水平均高于哮喘组(P均<0.05),差异有统计学意义,而正常对照组、BCG干预组、ASIT对照组之间两两比较,CD80、CD83表达水平差异无统计学意义(P>0.05);CD1a、HLA-DR和CD86的表达水平四组之间差异均无统计学意义(P均>0.05);(3)正常对照组、BCG干预组和ASIT对照组DCs分泌IL-12水平均高于哮喘组,差异有统计学意义(P均<0.05),正常对照组IL-12水平高于BCG干预组和ASIT对照组(P<0.05),而BCG干预组和ASIT对照组的差异无统计学意义(P>0.05);哮喘组、BCG干预组和ASIT对照组DCs分泌IL-10水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P均<0.05),ASIT对照组低于哮喘组和BCG干预组(P<0.05),而哮喘组与BCG干预组比较差别无统计学意义(P>0.05);(4)BCG干预组、哮喘组及ASIT对照组DC刺激同种异体淋巴细胞增殖增殖倍数高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而BCG干预组、哮喘组、ASIT对照组两两比较的差别无统计学意义(P>0.05)。
结论:
1、BCG可影响哮喘患儿PBMC来源DCs的成熟状态。
2、BCG可提高哮喘患儿PBMC来源的DCs表面CD80表达,上调IL-12分泌水平,促进Th0细胞向Th1细胞分化,从而调节Th1/Th2之间平衡。
3、BCG对哮喘患儿PBMC来源的DC成熟和免疫功能的影响与ASIT存在相似之处,可作为一种免疫调节剂在哮喘等过敏性疾病的防治中起一定的作用。