【摘 要】
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Bt L-7601是一株野生菌株,属于苏云金芽孢杆菌松毛虫亚种(subsp.dendrolimus),其血清型为H4a4b,是从自然界染病的西伯利亚松毛虫(Dendrolimus sibiricus)中分离得到.它在细胞
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Bt L-7601是一株野生菌株,属于苏云金芽孢杆菌松毛虫亚种(subsp.dendrolimus),其血清型为H4a4b,是从自然界染病的西伯利亚松毛虫(Dendrolimus sibiricus)中分离得到.它在细胞生长的营养期中能合成一种棕黑色的色素,并且培养基中不需要添加L-酪氨酸或酪氨酸类似物.色素形成的量,与培养基有关,在LB,NB和发酵培养基中,色素的最大产量分别为0.223mg/mL、0.257mg/mL和0.227mg/mL.其中,NB培养基中形成的量最高.通过对标准黑色素和L-7601黑色素所进行的一系列的化学测定、紫外吸收和红外吸收分析,确定其为黑色素.Bt L-7601本身有很强的紫外抗性,相比Bt 15A3,其细胞经过紫外照射10、30和60 min后,其成活率分别为89.6﹪、89.4﹪和25.5﹪,而Bt 15A3仅分别为14.1﹪、5.2﹪和0.4﹪.对分别加有Bt L-7601黑色素、标准黑色素和没有加黑色素的Bt制剂进行的紫外线保护对比研究证明,Bt L-7601所产黑色素与标准黑色素具有相同的保护效果.紫外照射5 h后,对棉铃虫进行生物测定,结果显示,加有Bt L-7601黑色素和标准黑色素的Bt制剂的残余毒力基本相同,都是不加黑色素的1.6倍.对甜菜夜蛾生物测定显示,加有Bt L-7601黑色素的Bt制剂的毒力是没有加黑色素的12.8倍.同时,保留黑色素和除去黑色素的Bt L-7601发酵液经紫外照射5 h后的生物测定结果显示,Bt L-7601黑色素对棉铃虫和甜菜夜蛾的紫外保护效果分别为1.5倍和14.4倍.由此证明,Bt L-7601的黑色素对杀虫晶体蛋白有很好的紫外保护.经紫外照射后,用胰蛋白酶对保留Bt L-7601黑色素和除去此黑色素的晶体蛋白溶液进行处理,通过SDS-PAGE检测发现,没有黑色素的晶体蛋白完全溶解,而保留有黑色素的晶体蛋白的蛋白带和没有经紫外照射的原液的蛋白带是一样的.由此,可以确定,黑色素对晶体蛋白的保护作用是明显的.采用特异引物PCR方法对Bt L-7601进行杀虫晶体蛋白基因的检测,证明在cry1Ac、cry1C、cry1B、cry1E和cry2中,Bt L-7601只含有cry1B基因.通过SDS消质粒法,得到了Bt L-7601的消质粒株.
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