论文部分内容阅读
第一部分胰岛素受体基因与多囊卵巢综合征相关性的病例-对照研究研究背景：多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女最常见的一种复杂的内分泌异常及代谢紊乱所致的疾病,发病率占生育期妇女的5%-8%。其临床表现和生化特征具有高度异质性,以慢性无排卵和高雄激素血症为特征。PCOS确切的遗传方式及其分子机制目前仍不明了。近年来多数学者认为其病理生理机制是胰岛素抵抗(IR)以及继发的高胰岛素血症(HI)所致的代谢紊乱,这可能给PCOS的妇女带来严重的远期并发症,主要包括糖脂代谢异常所致的胰岛素抵抗(IR)、2型糖尿病(T2DM)、高血脂症、心血管疾病(CVD)甚至是代谢综合征(MS),以及慢性无排卵使雌激素依赖性肿瘤发生风险增加。多个候选基因已被证实与PCOS密切相关,在这些候选基因中,胰岛素受体(INSR)作为胰岛素信号转导途径的关键位点,其基因可能是PCOS的易感基因。INSR基因位于人第19对染色体短臂末端(19p13.3),在胰岛素代谢方面起着重要的作用。现有证据显示胰岛素受体(INSR)结合后缺陷是导致胰岛素抵抗(IR)的分子机制,胰岛素受体的酪氨酸激酶域突变已被证明可导致严重的胰岛素抵抗(IR)和高胰岛素血症(HI)。已有研究发现,INSR基因rs2252673多态位点与韩国人以及高加索人群的PCOS发病相关。在本课题中,我们选取INSR基因rs2252673位点在中国汉族人群中进行病例-对照研究,以探讨此位点与中国汉族人群PCOS发病易感性的相关性。目的：探讨胰岛素受体(INSR)基因rs2252673单核苷酸多态性(SNP)与我国多囊卵巢综合征(PCOS)发病易感性的关系,进一步确证INSR基因在多囊卵巢综合征发病中的风险。方法：选择2007年7月-2013年4月在山东大学附属生殖医院就诊的224例汉族PCOS患者和192例对照组,测量所有研究对象的身高、体重,并计算体重指数(BMI),并空腹测定卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)以及雌二醇(E2)；检测空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS),测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平。提取基因组DNA,采用PCR技术和直接测序法对INSR基因位点rs2252673进行基因型分析。根据其基因型分组,分别比较其各基因组间临床及代谢指标的差异；根据体重指数(BMI)对PCOS患者进行分组,对各亚组之间进行基因型的比较。结果：(1)PCOS组和对照组CC、CG和GG基因型频率分别为8%vs14.6%、38.8%vs42.2%,和53.1%vs43.2%, C、G等位基因频率分别为27.5%vs35.7%、72.5%vs64.3%；两组间INSR基因rs2252673基因型频率及等位基因频率差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)Rs2252673不同基因型间临床、代谢指标比较未发现明显的差别(P>0.05)。而将基因型CG和GG合并后,CG和GG基因型患者的胆固醇水平偏高(t=2.072,p=0.048)而高密度脂蛋白水平偏低(t=2.274,p=0.026)。而且,虽然在统计上没有意义,CG和GG基因型患者空腹血糖和空腹血胰岛素的水平也有升高的趋势。(3)在PCOS肥胖组与非肥胖组两组间SNP rs2252673基因型频率及等位基因频率无统计学差异((χ2=0.054, p=0.974; χ2=0.022, p=0.883)。结论：Rs2252673位点PCOS组G等位基因频率明显高于对照组,提示携带G等位基因的女性可能有较高的PCOS发病风险。INSR基因突变与PCOS糖脂代谢紊乱相关；INSR基因rs2252673位点多态性与PCOS的发病易感性相关,而且这种相关性不受体重的影响。进一步提示INSR基因可能是PCOS的易感基因。第二部分胰岛素受体基因与多囊卵巢综合征相关性的家系研究研究背景：绝大多数PCOS患者伴有胰岛素抵抗(IR)且有一定的家族倾向,而且胰岛素受体(INSR)在胰岛素代谢方面起着重要的作用。在本课题中,我们选取了INSR基因的三个单核苷酸多态(SNP)位点(rs3786681、rs17253937和rs2252673)在汉族人口中采用大样本的核心家系进行TDT分析,以探讨它们与PCOS发病易感性的相关性。TDT分析方法不受遗传方式的影响,不会受到人群分层、环境因素或是遗传异质性的影响。已有研究发现,INSR基因rs2252673多态位点与韩国人以及高加索人群的PCOS发病相关,前期我们针对此位点在中国汉族人群中进行了病例-对照的研究,也提示此位点与中国汉族人群PCOS发病易感性相关；而rs3786681和rs17253937则来自于本中心前期进行的全基因组关联研究(GWAS) SNP扫描,证实与PCOS密切相关。目的：探讨胰岛素受体(INSR)基因rs3786681、rs17253937和rs2252673三个SNP与我国多囊卵巢综合征(PCOS)发病易感性的关系,进一步确证INSR基因在多囊卵巢综合征发病中的风险。方法：选择2007年7月-2013年4月在山东大学附属生殖医院就诊的中国汉族PCOS患者为先证者,采用由其父亲、母亲以及患者本人组成的224个满足经典TDT分析的核心家系为研究对象。测量所有研究对象的身高、体重,并计算体重指数(BMI),空腹留取静脉血检测血糖(FBG)、胰岛素(FINS),测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平。采用PCR技术和直接测序法检测INSR基因三个SNPs rs3786681、rs17253937和rs2252673的基因型。采用TDT分析方法验证INSR基因三个SNPs在PCOS家系中是否存在危险等位基因的过度传递。结果：三个SNPs rs3786681、rs17253937和rs2252673基因型分布均符合哈迪一温伯格平衡；进行TDT检验后,SNP rs2252673存在传递不平衡,且危险等位基因G在患病子代中存在过度传递现象,并有统计学意义(transmitted/non-transmitted=120:88; χ2=4.923, p=0.027);而另外两个SNPsrs3786681和rs17253937,虽也检测到过度传递现象,但经过分析这种传递却没有统计学意义。结论：在PCOS的核心家系中,INSR基因rs2252673位点多态性与PCOS的发病易感性相关,进一步提示INSR基因可能是PCOS的易感基因。