高产纤维素酶枯草芽孢杆菌的筛选、应用及其产酶条件研究

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膳食纤维(Dietary fiber, DF)具有多种生理功能,被誉为人体的“第七大营养素”。其中的可溶性成分SDF (Soluble Dietary fiber, SDF),拥有比不溶性成分IDF (Insoluble Dietary fiber, IDF)更优的生理活性,具有较高应用价值和重要的研究意义。豆渣在我国产量巨大,其富含的纤维素类物质是SDF的理想来源。但是豆渣中天然的SDF较少,因此,必须进行一定的技术处理,以提高豆渣SDF的含量与得率。当前,以发酵技术和酶技术为代表的生物技术,被认为是最有发展潜力的技术手段之一,而菌种和酶类的选择与确定,则尤为重要。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的诸多优点,使其成为产酶和应用菌种的首选。为此,本论文研究了高产纤维素酶枯草芽孢杆菌菌株的筛选、发酵豆渣制备SDF的应用及其产纤维素酶的条件,研究结果如下:1、从自然界筛选获得一株产纤维素活力较高的枯草芽孢杆菌,并根据实验中的编号顺序,命名为BS-05。在筛选的自然条件下,该菌株产纤维素酶活力较高,羧甲基纤维素酶活力(Sodium carboxymethylcellulose activity, CMCA)和滤纸酶活力(Filter Paper Activity, FPA)分别为57.27 U/ml和58.97 U/ml。2、应用菌株BS-05发酵豆渣,并联用均质技术,制备了高含量的豆渣SDF。豆渣经发酵与均质处理后,SDF的得率提高约4倍。并且,与未发酵的豆渣SDF相比,发酵获得的SDF颗粒变小,结构变松散,其溶解性与持水力等理化性质都有不同程度的改善。3、研究获得了菌株BS-05产纤维素酶的最佳条件。其产酶培养基组成是:CMC-Na 2%、蛋白胨2%、酵母粉2%、NaCl 0.5%, K2HPO4 0.1%, MgSO4·7H2O0.02%;最优的培养条件是:培养温度37℃、培养基初始pH7、接种量5%、培养时间48h和产酶培养基装液量为60/250ml。在上述条件下,该菌株发酵产纤维素酶的活力最高,CMCA与FPA分别达195.46 U/ml和174.52 U/ml,分别为优化前的3.41倍和2.96倍。4、研究获得了菌株BS-05所产纤维素酶的部分酶学特性。研究结果显示,该酶的最适pH值为pH6-7,在该pH范围内保持60min,酶活稳定;最适温度为55℃,在65℃以下保持30min,仍有较高酶活。这为该酶的推广提供了应用参数。
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