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妊娠期糖尿病(GDM)是妊娠期发生的糖尿病(妊娠前有糖尿病者除外),主要表现为高胰岛素血症及餐后血糖的异常升高,是孕期常见的内分泌疾病,易发生酮症酸中毒.羊水过多发生率较非糖尿病孕妇高10倍;巨大儿发生率高达25%-42%;胎儿生长受限发生率为21%;早产发生率为10%-25%;胎儿畸形率为6%-8%;约1/3孕妇产后5-10年罹患2型糖尿病,其子代成年后发生肥胖、糖耐量异常及糖尿病的风险明显增加.可见,GDM对母儿健康造成严重并深远的影响. 但至今病因尚未明确.已有研究表明遗传因素、炎性因子、脂肪因子等可能与GDM有关.近年来研究显示胰岛素抵抗与GDM有关,而胰岛素与瘦素存在双向调节.此外,瘦素基因的甲基化与GDM的发病机制有关,但具体调节机制不明. 近年来的研究发现,DNA甲基化不是静态的而是动态变化的.5-甲基胞嘧啶(5mC)可被TET酶家族(TET1/2/3)催化氧化成5-羟甲基胞嘧啶(5hmC),并进一步氧化成5-胞嘧啶甲酰((5fC)和5-羧基胞嘧啶(5caC).5hmC水平的变化与多种疾病的发生相关.但是,至今尚未见GDM的发病是否与瘦素基因甲基化的动态变化有关的报道. 目的: 分析妊娠期糖尿病(GDM)孕妇及糖耐量正常(NGT)孕妇瘦素及其基因启动子区甲基化的动态变化水平,为进一步探索妊娠期糖尿病发病机制提供新思路. 方法: 1、样本收集:将样本分成两组,选取2013年4月至2014年4月在本院门诊行正规产检的GDM孕妇20例为研究组,同期产检NGT孕妇25例为对照组. 2、应用己糖激酶法测定两组孕妇空腹血糖,应用放射免疫法检测两组孕妇妊娠晚期血清瘦素水平. 3、应用Trizol法提取GDM及NGT两组孕妇胎盘组织总RNA,-80℃保存,以β-actin为内参对照,采用RT-PCR及荧光定量PCR检测瘦素基因在两组孕妇胎盘组织中的表达. 4、以GAPDH为内参照,运用免疫印迹方法(Western-blot、WB)检测两组孕妇妊娠晚期胎盘瘦素蛋白的表达. 5、应用氧化亚硫酸盐测序法(Oxidative bisulfite sequencing,OXBS-seq)及亚硫酸盐测序法(Bisulfite sequencing,BS-seq)法检测两组孕妇瘦素基因启动子区羟甲基化及甲基化水平. 分析瘦素基因甲基化动态变化对瘦素表达的影响及与妊娠期糖尿病的关系. 结果: 1、两组孕妇妊娠晚期血清瘦素水平比较,GDM明显高于NGT(P<0.05). 2、GDM孕妇胎盘组织瘦素mRNA及瘦素蛋白表达水平高于NGT组; 3、两组孕妇瘦素基因启动子区均发生甲基化及羟甲基化,GDM组甲基化水平高于NGT组(P<0.05);两组孕妇部分位点羟甲基化水平存在差异,但无统计学意义. 结论: 妊娠期糖尿病孕妇瘦素水平高于糖耐量正常孕妇;瘦素基因启动子区甲基化动态变化过程与妊娠期糖尿病的发病有一定相关性.