【摘 要】
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【目的】 寻找人肝脏细胞膜上乙型肝炎病毒（HBV）前S1区（preS1）的结合蛋白，为进一步研究HBV感染早期病毒与细胞相互作用机制的研究打下基础。 【方法】 1.用人肝癌细胞(He
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【目的】 寻找人肝脏细胞膜上乙型肝炎病毒（HBV）前S1区（preS1）的结合蛋白，为进一步研究HBV感染早期病毒与细胞相互作用机制的研究打下基础。 【方法】 1.用人肝癌细胞(HepG2)建立分离受体蛋白的方法，步骤如下：①preS1肽段钓取结合的膜蛋白：用生物素标记的preS1肽段为钓饵，与提取的膜蛋白4℃孵育过夜，加入链霉亲和素标记的磁珠，洗涤磁珠后收集结合蛋白。②SDS-PAGE电泳分离结合蛋白。③选取目的条带进行LC-MS/MS质谱分析及数据库检索。 2.用上述建立的免疫磁珠分离法获取人肝组织与preS1结合的膜蛋白，对质谱结果中蛋白的功能及其在HBV感染中的作用综合分析后，选取热休克蛋白96（gp96）作为preS1的候选受体，免疫组化法验证其在人肝脏组织上的表达及分布情况。 【结果】 1.HepG2细胞膜上与preS1结合的蛋白，通过SDS-PAGE电泳分离出了16条带，在45kD-97kD之间有9条带，大于97kD处有5条带，小于20kD处有2条带；选取其中的6条带，质谱分析出14种蛋白。 2.人肝脏组织膜上与preS1结合的蛋白，通过SDS-PAGE电泳分离出了18条带，在45kD-97kD之间有13条带，大于97kD处有4条带，小于20kD处有1条；选取其中的11条带，质谱分析出15种蛋白；免疫组化结果显示 gp96在人肝组织中细胞浆和细胞膜均有表达。 3.两者质谱分析结果显示有两种相同的蛋白即肌动蛋白β（actinβ）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）。 【结论】 1.免疫磁珠分离法可有效获得肝细胞膜上preS1结合的蛋白，是一种快速有效的分离受体蛋白的方法。 2.质谱分析的蛋白主要是与物质运输、细胞信号转导、抗原提呈、免疫调节以及能量代谢相关的蛋白。 3.gp96能与 preS1特异结合并且在肝细胞膜上表达，研究结果表明gp96可作为preS1的候选受体之一，其与细胞信号传导、天然免疫相关，可能参与HBV早期侵入肝细胞，为HBV早期感染机制的研究打下了基础。 4.HepG2细胞与preS1结合的蛋白和人肝组织与preS1结合的蛋白存在很大的差异性，提示在研究乙肝病毒感染肝细胞的初期阶段最好选用人肝组织。
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