炎调方调控HSP70在脓毒症大鼠在体和离体细胞中表达及其效应的实验研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guanxming
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目的:通过在体实验,验证炎调方对脓毒症大鼠机体的保护作用,观察炎调方在脓毒症发生中对HSP70及其它相关物质表达的调控作用,并尝试建立两者间的联系,从而探讨炎调方治疗脓毒症的作用机制。通过离体实验,观察炎调方药物血清对离体细胞表达HSP70及其它相关物质的调控效应,进一步验证炎调方的作用途径和位点。  方法:在体实验中,复制大鼠盲肠结扎穿孔术模型,观察正常及脓毒症大鼠肺组织病理改变、肺组织HSP70和NF-κB的表达水平、血清细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α、IL-10的水平,并比较应用炎调方干预脓毒症大鼠后对相应指标的影响。离体实验中观察炎调方药物血清对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响,及其对细胞HSP70、NF-κB、IL-1β、IL-8、TNF-α和IL-10表达的调控效应。通过上述实验研究探讨炎调方在治疗脓毒症中对机体损伤的保护机制。  结果:在体实验中,炎调方组各时间点死亡率低于模型组;炎调方组大鼠肺组织损伤较模型组轻;炎调方组肺组织HSP70基因转录活性和蛋白表达高于模型组,均有统计学意义;炎调方组大鼠肺组织细胞NK-κB活性低于模型组,有统计学意义;12h时炎调方组大鼠血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平低于模型组均有统计学意义。离体实验中,添加炎调方药物血清24小时后,各组别(10%、20%、30%浓度炎调方药物血清)的RAW264.7细胞存活率与未添加药物血清的空白对照组比较,均无统计学差异(p>0.05):炎调方药物血清使RAW264.7细胞的HSP70mRNAs表达量高于正常对照组,表达量随着时间推移而增加;正常对照组和添加了不同浓度炎调方药物血清的RAW264.7细胞,NF-κBmRNAs的表达量均呈现出随时间推移先增加后下降的趋势。炎调方药物血清使培养细胞IL-1βmRNAs、IL-1β、IL-8mRNAs、IL-8、TNF-αmRNAs、TNF-α的表达量均低于相应的正常对照组细胞。炎调方药物血清使细胞表达HSP70高于正常对照组:而炎调方药物血清+PDTC组和正常大鼠血清+PDTC组细胞在各时间点表达HSP70均高于正常对照组和炎调方药物血清组。炎调方药物血清使细胞表达NF-κB低于正常对照组;而炎调方药物血清+PDTC组和正常大鼠血清+PDTC组细胞NF-κB的表达低于正常对照组和炎调方药物血清组。  结论:通过在体实验研究,表明炎调方可以减轻脓毒症大鼠肺组织的损伤,对机体具有保护作用,这一作用可能是通过上调HSP70的表达,进而抑制NF-κB的活化和细胞因子的表达而达到的。通过离体实验研究,进一步验证了炎调方的上述作用途径。结合在体和离体实验结果,提示炎调方上调HSP70的表达是其治疗脓毒症机制的基础。
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