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背景和目的血清总胆固醇(TC)是常规实验室重要的测定项目,在高脂血症的诊断和心血管病的防治中都具有重要的意义。血清总胆固醇的测定是测定血中存在的脂蛋白形式的游离胆固醇和胆固醇酯。常规实验室进行总胆固醇的测定多数采用酶法测定,其方法简单、快速、方便,适合在生化分析仪上进行大批量测定。但是常规实验室所使用的仪器、试剂、校准品呈现多样化,为了使常规实验室测定的结果准确、一致,就需要用参考测量系统来实现其测定的标准化。从北京协和医院检验科2008年到2010年的卫生部室间质评结果和CAP室间质评结果去回溯,不同的室间质评因为基质效应的存在和分组的差异对结果的解读也有差异。参考方法由于程序繁琐,成本昂贵不适用于大规模的比对。本研究用超高效液相色谱复现了高效液相色谱测定胆固醇的候选参考方法,初步尝试了用复现的超高效液相色谱参考方法去赋值单一来源的新鲜冰冻血清,并尝试将其用于14个常规系统的校准。探讨了用这种模式去提高多系统血脂测定一致性的可能性。方法以乙醇作为溶剂,准确配制胆固醇标准溶液,用豆甾醇作为内标物,经过衍生化及提取等前处理,复现了高效液相色谱色谱测定胆固醇的方法,并对复现后方法进行了完善的方法学评价。留取同一来源的志愿者血清,用本研究复现的参考方法进行赋值,并验证其均质性和稳定性。进行了5个系统和14个系统的两次比对,比对采用常规校准品校准和标准物质校准两种模式进行测试不同浓度的54份新鲜混合血清。对结果进行参比系统的相关和偏差分析,并分析在医学决定水平处的偏差和对每个样本两种校准方式下的变异。结果本研究复现的高效液相色谱参考方法测定总胆固醇,其与NIST SRM的偏倚为0.75%；批内精密度均小于1.0%,批间精密度均小于3.0%。赋值新鲜冰冻血清用常规酶法检测CV均小于1.0%；90天内稳定性良好,赋值结果为4.56mmol/L,参考方法测试的不精密度为0.65%。两次比对各系统的不精密度均能满足要求,第一次比对中TC除了C系统1水平CV超过了NCEP的标准(<3.0%),其他系统精密度均可接受；TG各系统均满足NCEP的标准(<5.0%);第二次比对的精密度均满足NECP的标准。第一次比对中TC、TG测定中各系统测定值和相应校准方式下测定组均值做相关,r2均在0.95～1.00之间；第二次比对中TC测定C系统在常规校准和标物校准后与参考方法相关性较差；E系统在常规校准的时候与参考方法相比相关性较差,标物校准后相关性较好。TG的测定,以A(P)作为参比系统,C系统两种校准方式相关性较差；H系统常规校准相关性较差,标物校准后相关性较好。第一次比对中,TC测定中常规校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<3.0%)有4水平,标物校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<3.0%)有0水平；TG测定中常规校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<7.5%)有2水平,标物校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<7.5%)有1水平。第二次比对中,TC测定中常规校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<3.0%)有15水平,标物校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<3.0%)有4水平；TG测定中常规校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<7.5%)有15水平,标物校准下医学绝对水平偏差超过NCEP标准(<7.5%)有12水平。对两种校准方式下各系统间的变异比较,第一次比对中TC常规检测系统间结果的变异为2.19～23.43%,标物校准检测结果的变异为1.35～5.05%；TG常规检测结果的变异为3.76～23.65%,标物校准检测结果的变异为0.66～18.43%。第二次比对中,TC常规检测结果的变异为4.79～13.83%,标物校准检测结果的变异为2.94～7.60%；TG常规检测结果的变异为5.44～24.67%,标物校准检测结果的变异为2.92～14.00%。在溯源链比较高的赋值血清用于统一校准后,各系统结果间的差异显著变小。结论本研究复现的高效液相色谱测定TC的参考方法准确度和精密度均达到要求,使用其进行新鲜冰冻血清的赋值,再应用于不同的检测系统进行统一校准,可以有效的提高结果的一致性。