【摘 要】
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鱼类的卵黄蛋白原(Vitellogenin,VTG)作为环境雌激素的“生物标志物”已得到了公认。本研究尝试建立一个检测环境雌激素的新方法,通过利用时间分辨免疫荧光分析技术(Time-res
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鱼类的卵黄蛋白原(Vitellogenin,VTG)作为环境雌激素的“生物标志物”已得到了公认。本研究尝试建立一个检测环境雌激素的新方法,通过利用时间分辨免疫荧光分析技术(Time-resolvedfluoregcence analysis)检测唐鱼卵黄蛋白原从而间接检测环境雌激素。具体而言,以唐鱼Lv抗血清为抗体,Lv作为标准品建立间接时间分辨免疫荧光分析法,检测实验鱼唐鱼整体匀浆中Vtg的含量。
本实验在Elisa检测的基础上,通过多次试验和验证,筛选出下列实验条件:
1、抗原Lv的最佳包被浓度为10ug/ml；
2、LV抗血清:Eu—DTTA的最佳质量比为1:0.6,标记的工作浓度为400ng/ml；
3、铕标记物的工作浓度为400ng/ml,选择孵育温度为室温,反应时间为2小时；
4、标准曲线的线性分析范围为0.1-300ng/ml,分析灵敏度为0.04ng/ml；
5、包被板的稳定性:真空封闭的包被板,置于37℃与4℃保存时放置3天、7天、300天,其荧光值几乎没有变化,说明了包被板的稳定性高,有效期长达一年。
ELISA方法检测唐鱼整体匀浆中Vtg其线性范围是3.36ng/mL-215.04ng/mL,灵敏度为8.624ng/mL,批内误差为2.415％,批间误差为5.718％。检测时要求现配现用的及时性,对检测时间的要求较严格。
TRFIA方法检测的线性范围是0.1-300ng/ml,该方法分析灵敏度为0.04ng/ml。一个月内标准曲线重复10次,每次每个标准点3个复孔,批内变异系数(CV)是3.52％,批间变异系数(CV)是5.73％,检测有效期长达一年。
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