【摘 要】
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该实验选择分泌鼠狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F6,从中提取高分子量基因组DNA,根据鼠抗体重链可变区框架结构(FR)的保守性,设计出分别针对于FR1及FR4的一对引物,然后利
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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该实验选择分泌鼠狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F6,从中提取高分子量基因组DNA,根据鼠抗体重链可变区框架结构(FR)的保守性,设计出分别针对于FR1及FR4的一对引物,然后利用PCR技术,扩增出抗体重链可变区(VH)基因,大小约为360bp.扩增产物纯化后,克隆在质粒载体pUC18上,重组质粒转化感受态宿主菌JM109、经蓝、白斑筛选、单酶切初步鉴定,双脱氧链终止法序列分析,证实所克隆的片段确为鼠单抗重链可变区基因.然后将其克隆到噬菌粒表达载体pHEN1中,并转化抑制型菌株JM109,经单、双酶切及PCR鉴定,阳性重组噬菌粒经过辅助噬菌体M13K07诱导,将VH单域抗体与噬菌体表面蛋白cpⅢ以融合蛋白的形式呈现在噬菌体表面.阻断ELISA实验及含重组噬菌体的细菌培养上清与RV抗原共沉淀实验都表明该抗体片段具有一定的特异性抗原结合活性.
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