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基因组的稳定性不断地被DNA损伤挑战,每天每个细胞遭受数十万次DNA损伤事件。这些DNA损伤事件由正常细胞代谢废物或者DNA复制压力导致,也可以由辐射和环境中化学毒物导致。在淋巴细胞和生殖细胞,DNA损伤也可能由基因组重排引起。DNA损伤可以干预DNA复制和转录,并导致基因突变和染色体断裂紊乱。DNA损伤应答系统维持着基因组的稳定性,消除DNA损伤的不利结果,阻止它们向子代细胞传递。DNA损伤应答系统的缺陷将导致衰老和各种紊乱包括发育缺陷、退行性神经性疾病和肿瘤的发生。因此,一个有效的DNA损伤应答系统对于细胞和有机体的生存是非常重要的。miRNA是一种大小约18bp~22bp、非编码RNA分子。miRNA主要通过结合靶基因mRNA 3’UTR区域的miRNA结合元件来调节靶基因转录后水平,其调节靶基因转录后沉默通过同源mRNA的特异性切割或者特异性抑制蛋白质合成两种方式。近来研究鉴定出了miRNA成熟所必需的多种亚单位蛋白复合体并将其命名为微处理器。微处理器包括:Drosha、RNase III核酸内切酶和DGCR8。据预测在人类大约有2000个miRNA,超过900个miRNA已经被证实,调节人类30%的基因。miRNA除了在正常发育和细胞生理过程中发挥着重要的功能,随着研究发现miRNA功能的紊乱有助于人类疾病的发生,其紊乱可以导致神经退行性疾病、肿瘤、心脑血管疾病等一系列疾病的发生。DNA损伤时DNA损伤应答基因在转录水平和转录后水平被调节。miRNA作为一个非编码RNA,在DNA损伤时也可以转录和转录后水平被调节。目的:有大量研究已经在体外对DNA损伤时miRNA的功能进行了研究。然而,在果蝇体内miRNA对DNA损伤反应还缺乏系统性研究。本研究以果蝇为模型,初步分析了miRNA在DNA损伤应答中的功能。方法:1本实验室前期实验人员通过RNA-seq方式筛选出了46个p53依赖性和非依赖性差异表达的miRNAs。2利用分子克隆技术构建了miRNAs gRNA质粒和miRNAs转基因质粒。3通过离子辐照敏感性实验,研究了mir-1011、mir-318、mir-278、mir-8、mir-932、mir-274、mir-9c、mir-375果蝇突变体对DNA损伤敏感性检测。4通过Brd U染色实验,检测了miR-1011和miR-318突变对G1/S细胞周期检验点的影响。5通过PH3染色实验,检测了miR-1011和miR-318突变对G2/M细胞周期检验点的影响。结论:1本实验成功构建21个miRNAs gRNA质粒和22个miRNAs转基因质粒。2通过γ-辐照敏感实验,本实验发现mir-1011、mir-318、mir-278突变果蝇对辐照非常敏感;mir-8突变果蝇对辐照微弱敏感;mir-932突变果蝇对辐照产生抵抗;mir-274、mir-9c、mir-375突变果蝇对辐照不敏感。3本实验发现mir-1011主要通过调节G1/S细胞周期检验点参与DNA损伤应答。4本实验发现mir-318对G1/S、G2/M细胞周期检验点没有影响。