【摘 要】
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目的:构建EZH2降表达胶质瘤干细胞株,探讨脑胶质细胞瘤中EZH2对肿瘤免疫反应的影响。方法:建立C6胶质瘤干细胞系,并采用慢病毒转染构建EZH2降表达胶质瘤干细胞系。细胞培养观察降表达细胞系细胞增殖情况,7-AAD和Annexin V检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞株表面MHCII,PD1和PDL1分子的表达。将EZH2降表达胶质瘤干细胞移植入C57BL/6小鼠脑内,观测小鼠生存率,HE染色
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目的:构建EZH2降表达胶质瘤干细胞株,探讨脑胶质细胞瘤中EZH2对肿瘤免疫反应的影响。方法:建立C6胶质瘤干细胞系,并采用慢病毒转染构建EZH2降表达胶质瘤干细胞系。细胞培养观察降表达细胞系细胞增殖情况,7-AAD和Annexin V检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞株表面MHCII,PD1和PDL1分子的表达。将EZH2降表达胶质瘤干细胞移植入C57BL/6小鼠脑内,观测小鼠生存率,HE染色观察肿瘤组织病理,流式细胞术分析脑内浸润的淋巴细胞,并分析T细胞和NK细胞的比例和功能。结果:1.用无血清干细胞培养基培养C6胶质瘤细胞可形成干细胞肿瘤球体,Nestin表达量占72.2%。将shEZH2慢病毒转染至C6胶质瘤干细胞,通过Real time-PCR和western blot鉴定证明EZH2降表达细胞株成功建立;2.CCK8和细胞计数发现EZH2降表达后,第5天开始肿瘤干细胞增殖减少,凋亡增加;且肿瘤干细胞球形成减少,细胞贴壁分化增多;3.EZH2降表达后,细胞表面MHC II和PDL1表达较对照组增高。4.小鼠脑移植EZH2降表达胶质瘤干细胞,肿瘤生长较对照组缓慢,且动物生存期延长。5.流式细胞术检测显示脑内浸润的淋巴细胞数量增加,CD4+、CD8+T细胞和NK细胞数量增加,并增强了 CD8+T细胞和NK细胞活性;此外还减少了脑内Treg细胞的比例。结论:EZH2基因敲降后能抑制脑胶质瘤细胞生长,促进肿瘤细胞干细胞分化和凋亡,并能改变肿瘤细胞表面抗原的表达,影响肿瘤免疫反应,从而抑制肿瘤生长,延长小鼠生存率。
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