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目的:血管生成拟态是近年在肿瘤中发现的一种特殊血供方式,其管道由高度恶性的肿瘤细胞围成。血管生成拟态的出现往往与患者预后欠佳相关,故而探究血管生成拟态发生的机制并阻断其形成显得尤为重要。文献表明形成血管生成拟态的细胞往往具有高度侵袭性,这些肿瘤细胞更强的自身变形能力及迁移运动能力与其形成血管生成拟态密切相关。轴突导向因子sema4D与其高亲和力受体plexinB1结合,激活小G蛋白家族RhoA及其下游激酶参与调控细胞的骨架在内皮细胞迁移运动及形成新生血管中发挥重要作用,那么该通路是否也参与了肿瘤血管生成拟态的形成?已有多篇文献报道在肺癌中发现了血管生成拟态的结构,因此,本文旨在探讨sema4D/plexinB1及下游的RhoA/ROCK信号通路在非小细胞肺癌血管生成拟态形成中的作用及可能机制。方法:(1)本研究采用免疫组化的方法检测非小细胞肺癌患者肺癌组织标本中血管生成拟态形成情况以及sema4D的表达情况,并探究两者间的关系。(2)利用慢病毒介导的shRNA靶向干扰非小细胞肺癌细胞株H1299及HCC827中sema4D的表达,通过成管实验检测下调sema4D对肺癌细胞株管道形成能力的影响、Western Blot检测血管生成拟态相关蛋白表达、构建动物移植瘤模型等体外及在体实验探究sema4D在肺癌细胞H1299、HCC827形成血管生成拟态中的作用。(3)利用siRNA技术下调H1299和HCC827细胞plexinB1表达、fasudil抑制RhoA下游ROCK的表达,通过成管实验观察细胞成管能力变化、Western Blot检测该信号通路相关蛋白表达,并将下调了 sema4D的H1299、HCC827细胞进行细胞骨架染色、划痕实验、Transwell迁移实验,进一步探究sema4D影响非小细胞肺癌细胞株H1299、HCC827血管生成拟态形成的机制。结果:(1)证实非小细胞肺癌患者肿瘤组织中存在血管生成拟态这种特殊的血管生成方式,肿瘤组织中sema4D较癌旁组织高表达,且sema4D表达情况与血管生成拟态形成密切相关。(2)体内外实验证实sema4D在肺癌血管生成拟态形成中发挥重要作用,靶向抑制sema4D能够减少H1299、HCC827细胞血管生成拟态的形成及降低其血管生成拟态相关蛋白的表达,同时靶向抑制sema4D可降低肺癌细胞株H1299、HCC827在动物皮下及原位移植瘤模型中的成瘤能力及形成血管生成拟态的能力。(3)证实sema4D是通过与其受体plexinB1结合激活下游RhoA/ROCK通路影响肺癌H1299、HCC827细胞的VM形成。且靶向抑制sema4D后H1299、HCC827细胞的细胞骨架应力纤维减少,细胞迁移能力下降。结论:sema4D通过与肺癌细胞表面其高亲和力受体plexinB1结合激活RhoA/ROCK通路调节肺癌细胞的迁移能力在肺癌VM的形成过程中发挥重要作用,靶向调控非小细胞肺癌中sema4D/plexinB1及下游RhoA/ROCK通路,降低肿瘤细胞的可塑性及迁移能力,有望阻断肿瘤血管生成拟态这种血供模式、遏制肿瘤细胞生长及转移。