【摘 要】
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神经生长因子(Nerve growth factor,hNGF)是一类对于中枢和周围神经元的存活和分化起着重要作用的神经营养因子,并且参与维系神经,免疫和内分泌系统之间的平衡.将人的神经
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神经生长因子(Nerve growth factor,hNGF)是一类对于中枢和周围神经元的存活和分化起着重要作用的神经营养因子,并且参与维系神经,免疫和内分泌系统之间的平衡.将人的神经生长因子hNGF基因插入大肠杆菌表达载体pET-15b和甲醇营养性酵母Pichia.pastoris分泌表达载体pHIL-S1中,分别构建成重组质粒pENGF和pSNGF,相应转化大肠杆菌BL21(DE3)和P.pastorisGS115(Mut<+>,His<->).大肠杆菌重组菌株在IPTG的诱导下,融合蛋白以可溶蛋白和包含体的形式表达.电泳扫描分析表达的融合蛋白占细胞总蛋白量的10.3%,Western blot检测表明具有免疫活性.酵母重组表达载体pSNGF受乙醇氧化酶(AOX1)启动子的调控和酸性磷酸酶(PHO1)信号肽的引导,在甲醇诱导下外泌表达hNGF蛋白.在不含组氨酸平板上生长的酵母转化子通过PCR进一步筛选阳性克隆,P.pastoris重组菌株SDS-PAGE蛋白电泳表明发酵液中有特异表达带,扫描分析占胞外总蛋白的14.4%,Western blot证实该分泌蛋白具有hNGF的免疫活性.
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