重组人干扰素α2b-胸腺素α1系列融合基因的构建表达及初步功能研究

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干扰素α2b是一种多功能的细胞因子,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种作用。胸腺素α1是一种由28个氨基酸残基组成的多肽,具备多种免疫调节作用。   目前临床上使用的胸腺素α1是一种化学合成产品,存在着成本高、费用大的缺点,限制了该治疗方案的应用推广。通过基因工程方法单纯表达胸腺素α1又存在着一系列的技术困难,采用基因工程技术研制重组人干扰素α2b-胸腺素α1的融合蛋白是实施该治疗方案来源的有效途径。本研究设计、构建了一系列的人干扰素α2b和胸腺素α1融合基因。为了尽量避免融合蛋白对两个组成单元的功能造成影响,我们选用了具有高度灵活性和低免疫原性的(G4S)nlinker多肽将两者相连。本文总共获得了具备不同长度的linker三种融合基因,并分别构建了三种融合基因的表达载体,它们都在毕赤酵母pPIC9表达系统中得到了高水平分泌表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot实验确证。我们进一步通过离子交换层析和凝胶过滤层析获得了三种融合蛋白的纯化产品,通过玫瑰花结实验和抗病毒实验对蛋白的功能进行了初步的研究。对三组融合蛋白的初步研究表明,干扰素α2b和胸腺素α1在融合的情况下仍具有各自的功能,linker的长度对融合蛋白的表达和功能没有明显的影响。
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