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目的：建立检测血清抗瓜氨酸蛋白自身抗体(ACPA)特异性免疫复合物(ACPA-IC)的ELISA技术。提取并纯化类风湿关节炎(RA)患者血清中的ACPA-IC,并对ACPA-IC中的抗原进行鉴定。研究ACPA-IC对RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响。
方法：⑴建立检测人血清ACPA-IC的ELISA技术。收集RA、SLE患者以及健康人血清,用PEG6000沉淀法提取血清中IC,检测IC中的ACPA-IC水平,并与年龄、ACPA、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)、抗“O”、血沉(ESR)、IgG、IgA、IgM、补体C3、补体C4等参数进行相关性分析。⑵采用G蛋白免疫亲和层析法,纯化RA患者血清中的IC,Western-blotting检测IC中四种自身抗原。⑶收集手术切除的RA患者关节滑膜组织,应用胶原酶法消化提取滑膜组织细胞,体外培养成纤维样滑膜细胞(FLS)。⑷用纯化的IC刺激FLS,采用CCK-8方法检测刺激后FLS的增殖情况,ELISA检测培养上清中FLS分泌的IL-8含量。
结果：①成功建立检测血清ACPA-IC水平的ELISA技术。ACPA阳性RA患者血清中ACPA-IC水平明显高于ACPA阴性RA患者ACPA-IC,RA患者血清ACPA-IC水平显著高于SLE患者和正常对照,并与ACPA浓度、RF和ESR呈正相关性,其r值分别为0.978、0.471和0.44,P值均小于0.05。而与年龄、CRP、抗“O”、IgG、lea、IgM、补体C3、补体C4等参数无相关性。②通过G蛋白免疫层析法从RA血清中提取IC,SDS-PAGE鉴定IC的结果表明,用G蛋白柱免疫亲和层析法从血清中可纯化出纯度较高的抗原抗体IC。Western-blotting结果显示,ACPA+RA患者血清IC含有含有较高水平的GRP75抗原,Grp75主要定位在FLSs胞浆中。③CCK-8细胞增殖试验结果表明,RA患者血清ACPA—IC可以明显促进FLS增殖；并可刺激FLS分泌大量IL-8(P≤0.05)。
结论：⑴成功建立检测特异性ACPA-IC的ELISA技术,RA患者血清ACPA-IC水平显著高于SLE患者和正常对照,并与ACPA、RF和ESR含量具有相关性。⑵ACPA-IC阳性RA患者血清IC中含有特异性ACPA-Grp75复合物。⑶RA血清ACPA-IC能够促进FLS生长及分泌IL-8。