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目的：肝再生增强因子（ALR）是从新生大鼠肝组织中克隆到的一种肝增殖刺激因子，其特异mRNA的表达与大鼠肝部分切除后肝细胞DNA合成密切相关，是一种特殊的促肝细胞分裂原，能特异地刺激肝细胞增殖，是肝再生的重要调控因子，能提高中毒性肝损伤动物的存活率，在肝损伤修复过程中发挥作用。本研究拟构建大鼠ALR真核表达质粒，以基因治疗的方式，观察CCL4诱导的急性肝损伤大鼠给予ALR基因后，大鼠的存活率、肝组织病理、肝细胞增殖和血清酶学的变化情况，探讨大鼠ALR基因对急性肝损伤的保护作用，以期为ALR基因治疗急性肝病提供理论依据和新的有效方法。方法：以本室保存的质粒pBV220-ALR为模板，用合成的引物进行PCR扩增，扩增条件为94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸2 min，30个循环结束后72℃延伸10 min，其扩增产物经HindⅢ和EcoR I双酶切后，与相同酶切的真核高效表达载体pcDNA3进行定向重组，连接产物转化感受态E.coli DH5a。于含氨苄青霉素的2×YT培养基筛选重组子，对阳性重组子进行酶切鉴定和测序。经大量扩增纯化后，紫外分光光度计测OD260定量。取40只大鼠一次性腹腔注射50% CCL4<WP=4>（1体积CCl4:1体积豆油）4ml/kg，复制急性肝衰竭模型。在染毒后4h，将大鼠随机分为治疗组和生理盐水组，每组20只，每12h分别腹腔注射ALR基因（200 μg/kg）和生理盐水，存活超过96h计为存活。另取36只大鼠按2ml/kg腹腔注射50% CCL4，染毒后4h按不同剂量（50μg/kg 和200μg/kg ）、不同注射途径（尾静脉注射、腹腔注射和联合注射）随机分为六组。1组：模型组，不注射ALR基因； 2组：尾静脉注射ALR基因 50μg/kg； 3组：尾静脉注射ALR基因 200μg/kg； 4组：腹腔注射ALR基因 50μg/kg； 5组：腹腔注射ALR基因 200μg/kg； 6组：联合注射（尾静脉和腹腔各注射ALR 基因100μg/kg）。各治疗组每12小时注射1次，共注射4次，末次注射后12h断头处死动物。另取4只为正常对照组。各组动物处死后进行肝组织病理学检查，外周血清AST、ALT水平测定及免疫组化法检测肝组织PCNA表达情况。存活率数据进行X 2检验，AST、ALT和PCNA进行单因素和多因素方差分析及两两比较。结果：构建的pcDNA3-ALR重组质粒目的基因与文献报道的大鼠ALR cDNA序列相同。用重组ALR治疗的结果表明ALR基因能明显提高CCl4诱导急性肝衰竭大鼠的存活率。形态学观察结果显示，各ALR治疗组均不同程度地减轻CCl4诱导急性肝损伤大鼠肝组织病理损害。光镜下观察PCNA指数，结果显示ALR可显著升高CCl4诱导肝损伤大鼠肝组织PCNA表达水平，促进肝细胞增殖。血清酶学结果表明ALR可显著降低外周血<WP=5>AST、ALT水平。采用不同剂量、不同注射途径观察ALR对各指标的影响，结果表明200μg/kg ALR较50 μg/kg ALR疗效佳；ALR不同注射途径作用效果为：静脉注射>联合注射>腹腔注射，提示静脉注射可作为基因直接注入法的首选治疗方式。结论：本研究成功构建了ALR的真核表达重组质粒pcDNA3-ALR，并进一步验证了 ALR在体内可提高CCl4诱导肝损伤大鼠生存率、促进肝细胞增殖和降低血清ALT、AST水平，从而发挥抗急性肝损伤作用。