【摘 要】
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原癌基因对于细胞生长、转化、分化和凋亡的调控具有重要的作用.其中c-myc和EF-1又是两个非常重要的原癌基因.研究人员分别采用反义寡聚核苷酸技术和建立稳定高表达细胞系方
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学
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原癌基因对于细胞生长、转化、分化和凋亡的调控具有重要的作用.其中c-myc和E<,2>F-1又是两个非常重要的原癌基因.研究人员分别采用反义寡聚核苷酸技术和建立稳定高表达细胞系方法,对于这两个癌基因在肝癌肿瘤细胞BEL-7404中的作用进行了初步的研究.研究人员设计了针对于c-myc,E<,2>F-1 mRNA特殊区域的互补寡聚核苷酸,专一性地阻断c-myc,E<,2>F-1 mRNA的表达.研究人员发现反义c-myc和反义E<,2>F-1均可抑制细胞的生长并伴随有剂量效应.根据用于作参照的正义和错义c-myc和E<,2>F-1对细胞生长无大影响,以及正义竞争实验可逆转反义的作用等结果,研究人员可以得出以下结论:反义c-myc和反义E<,2>F-1可以抑制肝癌细胞BEL-7404的生长.Mad也是一个与Max蛋白相结合并可通过竞争结合Max而抑制c-Myc蛋白作用的核内转录因子.他们构建了PCDNAⅢ-Mad真核表达质粒并转染BEL-7404细胞,通过一系列筛选和确定,研究人员得到了PCDNA-Mad高表达的细胞株.对此高表达细胞株进行分析检测,结果表明Mad的高表达可以有效抑制细胞的生长,下降肿瘤细胞集落化表型和锚定不依赖性等.同时研究人员发现Mad高表达细胞株在无血清条件下可以在一定程度上抑制由c-myc引起的p53介导的细胞凋亡.在加入反义c-myc及E<,2>F-1的细胞和mad高表达细胞株中,研究人员均通过RT-PCR方法检测到了cdc25A这个c-myc最重要靶基因表达的下调.
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