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一.研究背景:据大样本统计资料显示,皮层发育异常(malformationofcorticaldevelopment,MCD)占儿童难治性癫痫术后病理表现的50%以上,占成人难治性癫痫的20%左右。其中,以微发育不良(microdysgenesis,MD)和局灶性皮层发育不良(focalcorticaldysplasia,FCD)最为常见。MD和FCDⅠ型多见于颞叶癫痫,其共同的病理特征之一为白质内异位神经元的存在,而这一表现不仅见于癫痫患者的脑组织,也可见于先天性智力发育迟缓、精神病等疾病,甚至还可见于无神经系统疾病者的脑组织中,其病理意义不明。近年来,国外的几个研究机构曾对癫痫患者脑白质内神经元进行了定量研究以及对照研究,但不同的研究中心采用的测量方法存在差异,实验结果也各不相同。国内至今还没有相关的研究报道。迄今为止关于白质内神经元数目仍没有一个统一的定量诊断指标,这给我们的日常病理诊断工作造成了困扰。
二.研究目的:通过完成正常人和颞叶癫痫患者颞叶脑白质内神经元数目的定量测定及分布示意图,比较两者异同点,以达到为日常病理诊断工作以及为白质内神经元与癫痫发病机制关系的深入研究提供参考资料的目的。
三.研究方法:1.实验对象:本实验选取14例无神经系统疾病的中国人尸检标本作为正常组,取经外侧膝状体冠状平面的颞叶脑组织做大切片。选取12例病理诊断为MD以及FCDⅠ型的颞叶癫痫患者的颞叶冠状切除标本作为作为病例组。2.实验方法:实验采用石蜡包埋组织切片制作法,用0.4%冰醋酸展片以减少组织的伸缩度,切片进行HE染色、髓鞘染色(LuxolFastBlue,LFB染色)和抗神经元核抗体(Anti-neuronalnucleiAntibody,NeuN)免疫组织化学标记。根据LFB染色勾画白质区域,按照脑回的不同分为颞上回、颞中回、颞下回、海马旁回四组,按照距灰白质交界的远近分为A组(距灰白质交界1个高倍视野范围内)、B组(距灰白质交界2~4个高倍视野范围内)以及w组(距灰白质交界4个高倍视野范围外)三组。在400×放大倍数下,根据形态学特征以及NeuN免疫组化结果判定神经元,用OlympusDP70摄像系统进行图像采集,用美国Image-ProPlus5.0图像分析系统进行精确的细胞选取、测量与计数。
3.观察指标有:1)神经元密度(Neuron-density):指单位面积内神经元的数目,单位为个/mm2;2)细胞密度(Cell-density):指单位面积内神经元和胶质细胞的总数,单位为个/mm2;3)神经元百分比(Ratio):指单位面积内神经元占细胞总数的百分比,单位为%;4)神经元细胞核的最大直径(Max-diameterofneuronnuclear):指所观测平面内神经元细胞核的大小,单位为μm。
4.数据分析:用SPSSforWindowsVer.11.5统计分析软件,根据资料是否符合正态分布,选择均数±标准差或中位数来表示其平均水平,选择T检验(ttest)、单因素方差分析(One-WayANOVA)或秩和检验(RankSumTest)进行对比研究。
四.实验结果:1.正常人颞叶脑白质内神经元的分布情况在各脑回无明显差异,而与白质深度有相关性:离灰白质交界越远的区域神经元的细胞数越少,神经元与胶质细胞的总数越少,神经元占细胞总数的百分比越少,神经元细胞的大小也越小。
2.颞叶癫痫患者颞叶脑白质内深部区域(W组,距灰白质交界4个高倍视野以外)神经元数目明显增多,神经元占细胞总数的百分比也明显增大;神经元与胶质细胞的总数、神经元细胞的大小都和正常人一样随着与灰白质交界距离的增大而减少。
3.颞叶脑白质内神经元分布情况的总体变化规律为:病例组Neuron-density大于正常组,差异有统计学意义;Cell-density大于正常组,差异有统计学意义;Ratio小于正常组,差异无统计学意义。
4.颞叶脑白质内神经元大小的总体变化规律为:病例组Max-diameter大于正常组,差异有统计学意义。
五.结论:1.正常人颞叶脑白质内存在神经元。
2.正常人颞叶脑白质内神经元的分布与脑回无相关性,与距灰白质交界的距离有明显相关性。神经元密度、神经元与胶质细胞的总数以及神经元占细胞总数的百分比均随着与灰白质交界距离的增加而减少。神经元大小也随着与灰白质交界距离的增加而减少。
3.颞叶癫痫患者颞叶脑白质内神经元与胶质细胞的总数、神经元大小均随着与灰白质交界距离的增加而减少;深部白质区域神经元密度、神经元占细胞总数的百分比则明显增加。
4.颞叶癫痫患者颞叶脑白质单位面积内神经元数目、神经元与胶质细胞总数均明显多于正常人,神经元占细胞总数的比例与正常人无明显差异,神经元体积明显大于正常人。