抗人核仁素（nucleolin）单克隆抗体的研制

• 作 者: 冯春玲
• 机 构: 北京协和医学院
• 出 处: 中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 核仁素 血管细胞生成素 基因免疫 肽免疫 单克隆抗体

人促血液血管细胞生长因子(Hemangiopoietin，HAPO)是一个作用于早期造血细胞和内皮细胞系的细胞因子，能促进早期造血和血管细胞的黏附、增殖和趋化。
核仁素(Nucleolin)作为一个RNA结合蛋白主要存在于细胞核内，分子量为110kDa。后来研究发现nucleolin也存在于细胞质中及细胞膜上，其功能涉及转运细胞因子及构成细胞信号传导通路。
免疫共沉淀和免疫印记实验发现EVC-304细胞中的nucleolin能够与HAPO特异性结合，这提示我们nucleolin可能成为HAPO的受体。因此，本实验选择人nucleolin基因、nucleolin N端肽以及nucleolinC端肽作为免疫原，采用三种免疫方案，应用杂交瘤技术，制备抗人nucleolin单克隆抗体。通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、westernblot分析、间接免疫荧光试验、流式细胞术(FCM)、非竞争ELISA、ELISA相加试验等鉴定抗体的特异性。
实验得到三株抗人nucIeolin N端肽单克隆抗体(分别命名为8G12、9E8、9E10)及抗人nucleolin C端肽多克隆抗体。实验结果表明8G12、9E8、9E10识别同一抗原表位；8G12、9E8及抗人nucleolinC端肽多克隆抗体既可与ECV-304、U937细胞中变性的nucleolin蛋白特异性结合也能够与ECV-304、U937细胞表面天然的nucleolin分子特异结合；且8G12可与HAPO竞争性结合U937细胞表面的nucleolin分子。通过基因和肽免疫，得到特异性较强的抗人nucleolin单克隆抗体，此抗体可与HAPO竞争性结合U937细胞表面的nucleolin分子，为进一步揭示nucleolin的生物学功能和探讨HAPO参与造血以及血管系统的生成和分化等作用机制提供有力的研究工具。