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目的:通过免疫动物体内外细胞毒效应的研究，证实热休克蛋白70功能肽-甲胎蛋白抗原表位肽（HSP70-P/AFP-P）复合物激活后的特异性CD8+T细胞和NK细胞介导了针对甲胎蛋白的特异性抗瘤免疫，明确抗瘤免疫的效应机制。 方法: 1.应用氨基酸偶联法构建热休克蛋白70功能肽-甲胎蛋白抗原表位肽复合物，并用高效液相色谱法(HPLC)纯化，质谱分析法(MS)鉴定重组双肽复合物的结构及纯度。 2.纯化后的重组双肽复合物体外免疫荷瘤小鼠，激活特异性的CD8+ T细胞和自然杀伤（NK）细胞。采用脾混合淋巴细胞的细胞毒性实验，测定其抗瘤效应；利用免疫磁珠分选技术分离纯化CD8+T细胞和NK细胞，以流式细胞分析法（FCM）鉴定免疫磁珠分选的效果；采用酶联免疫吸附试验（Elisa），分别检测CD8+ T细胞和NK细胞上清液中的穿孔素和颗粒酶-B的表达；分别做纯化后的CD8+T细胞和NK细胞的细胞毒性实验，设立PBS模型组，AFP-P多肽免疫组，HSP70-P多肽免疫组作为对照，证实纯化免疫细胞的抗瘤效应。 3.用纯化后的双肽复合物体内免疫荷瘤小鼠，28天后处死，测量瘤块大小，并做HE切片，镜下观察瘤块组织形态学变化。 结果: 1.经高效液相色谱法和质谱分析法鉴定，HSP70-P/AFP-P、HSP70-P和AFP-P三种抗原肽的纯度较高（98%以上），抗原肽HSP70-P/AFP-P复合物的分子量为抗原肽HSP70-P与AFP-P的分子量之和，证实纯化的热休克蛋白70功能肽-甲胎蛋白抗原表位肽复合物结构正确。 2.流式细胞分析法鉴定免疫磁珠分选出的CD8+T细胞和NK细胞的纯度，均在90%以上。 3.与其他实验组相比， HSP70-P/AFP-P复合物免疫小鼠脾混合淋巴细胞以及纯化的CD8+ T细胞和NK细胞对H22肝癌细胞均具有较强的杀伤效应；HSP70-P/AFP-P复合物免疫组纯化的CD8+ T细胞和NK细胞上清液中均检测到较高水平的穿孔素和颗粒酶-B的表达。 4.与其他实验组相比，HSP70-P/AFP-P复合物免疫组小鼠瘤块体积较小，镜下可见片状坏死，核固缩、碎裂、溶解消失，呈均质红染无结构的颗粒状。 结论:HSP70-P/AFP-P复合物免疫荷瘤小鼠后，诱发了针对H22肝癌细胞的杀伤效应，其机制与HSP70-P/AFP-P复合物激活特异性CD8+T细胞和NK细胞，介导针对AFP的特异性抗瘤免疫有关。