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胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，早期即可侵袭或转移到临近肝组织和肝门结构，预后差。与其他消化道肿瘤相比，胆囊癌转移规律研究相对较少。大多数胆囊癌转移相关研究以手术切除标本的病理学观察结果和分子病理学发现为主要依据，以临床病例回顾性分析和描述性报道为主要特点。本文以一对遗传背景来源相同但是转移性不同的胆囊癌细胞系作为研究对象，研究了与高转移细胞系的转移性和耐药性相关的分子机理。
在本论文的第一章中，我们首先比较了人胆囊癌细胞系GBC-SD和GBC-SD/M3细胞在转移性能方面的差别，证实了GBC-SD/M3的迁移能力明显高于GBC-SD，GBC-SD/M3系从GBC-SD胆囊癌实验性肝转移模型中进一步筛选得到的高转移亚群细胞。通过二维电泳结合质谱分析，我们共鉴定出26个差异在3倍以上的蛋白。从中我们选取了两个在GBC-SD/M3细胞中上调的可能与肿瘤转移相关的蛋白Ezrin和Vimentin进行了下面的研究。RT-PCR、real-time PCR以及western blotting实验证实，GBC-SD/M3的Vimentin的表达量明显高于GBC-SD，与蛋白质组结果相一致。然而，另一个候选分子Ezrin的mRNA和蛋白表达水平在两个细胞系中均没有明显的变化。为了确证Vimentin在高转移株GBC-SD/M3细胞中高表达的意义，我们对临床来源的7对胆囊癌样品进行了检测。临床样本中进行的western blotting实验也表明，Vimentin在同一患者的转移灶的表达量要普遍高于原发灶的表达量，提示Vimentin表达的上调在胆囊癌的转移中可能具有普遍性。既然Vimentin的高表达与胆囊癌细胞的高转移性具有一定的对应关系，接下来，我们又通过RNA干扰实验来反向验证Vimentin在胆囊癌细胞转移中的作用。通过商品化的Vimentin-stealth RNA，Vimentin的表达被显著下调，与此同时，GBC-SD以及GBC-SD/M3细胞的迁移和侵袭能力均有了显著下降。这一结果进一步证实Vimentin在胆囊癌细胞转移中发挥了关键作用。另一方面，结合基因芯片比对分析的结果，我们推测Vimentin的上调可能与细胞发生了细胞上皮间质转化(EMT)有关，接下来的PCR的实验结果证实了这一推测。
在第二章中，我们发现了与GBC-SD相比高转移柱GBC-SD/M3对于VP16(etoposide)具有更强的耐受性。通过细胞周期实验，我们发现GBC-SD/M3对VP16的细胞周期阻滞作用有较强的抵抗。我们实验室的前期研究发现，肝再生磷酸酶-3(PRL-3)分子在这一过程中也发挥了关键的作用。我们通过PCR实验也发现GBC-SD/M3中的PRL-3表达量较GBC-SD更高，而使用PRL-3特异性抑制剂在抑制GBC-SD/M3中的PRL-3后，GBC-SD/M3细胞抵抗VP16周期阻滞的能力则明显减弱。
综上所述，本研究首先发现了胆囊癌高转移株GBC-SD/M3高表达Vimentin分子，且Vimentin的表达上调在临床胆囊癌转移样本中具有一定的普遍性。通过RNA干扰实验，我们证实Vimentin对于GBC-SD/M3细胞的转移性至关重要。进一步通过基因芯片和RT-PCR实验发现，Vimentin在GBC-SD/M3中高表达可能与GBC-SD/M3细胞发生了细胞上皮间质转化(EMT)有关。另一方面，我们还发现GBC-SD/M3细胞对VP16有较强的耐药性，且这种耐药性是与GBC-SD/M3细胞中高表达PRL-3相关的。我们的研究结果为进一步研究将Vimentin和PRL-3作为治疗胆囊癌的靶点提供了分子基础。