论文部分内容阅读
目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)在慢性乙型肝炎肝纤维化不同进展阶段的免疫组化表达和定位情况，探讨二者在肝纤维化发生过程中的作用及其与肝脏炎症、血清肝纤维化指标的相关性，为bFGF、TGF-β1作为反映肝纤维化的指标提供了理论依据，并提示可以针对二者开展抗纤维化治疗的研究。
方法：
1病例选择：随机选取260例2005年7月至2007年9月我院住院的慢性乙型肝炎患者，按照2000年西安会议修订《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准，其中慢性肝炎轻度60例，中度78例，重度66例，肝硬化56例；正常对照组30例，其标本于肝血管瘤或单纯胆囊切除术中取材。
2实验方法：所有患者于肝穿刺活检前两日内抽取空腹静脉血行肝功能、凝血酶原活动度(PTA)及血清肝纤四项：透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)检测，肝纤四项采用放射免疫法。所有患者行肝组织穿刺活检，取肝组织标本长度均在1.0cm-1.5cm之间，肝组织标本依次进行HE染色、MASSON三色染色、网状纤维染色及bFGF、TGF-β1免疫组化染色，用HPIAS 1000高清晰度彩色病理图文分析系统对肝脏bFGF、TGF-β1进行图象定量分析。观察bFGF及TGF-β1在正常对照组及慢性乙型肝炎肝纤维化不同进展阶段的表达、定位特点，并进行定量分析和相关性分析，各组间用SPSS13.0统计软件进行统计学比较。结果：
1肝组织bFGF免疫组化染色观察结果及定量分析结果：bFGF染色阳性物质呈棕黄色。S0期，bFGF不表达或仅表达于个别散在的肝细胞浆内及血管内皮细胞，且着色较浅；S1，S2期，bFGF表达部位主要以肝细胞和血管内皮细胞为主，同时在炎症坏死区、汇管区的胆管上皮细胞和成纤维细胞可呈阳性反应，且着色深；S3、S4期，bFGF阳性表达部位主要集中在血管纤维化间隔及肝窦壁、肝窦内皮细胞，同时亦可在肝细胞、固缩肝细胞、炎症坏死区表达，且表达强度呈明显递增趋势。S0组为对照组，S1、S2、S3、S4组的肝组织bFGF的面密度较S0组明显增加，其差异具有显著性(P值均<0.05)，S1-S4组的组间两两比较，bFGF的面密度逐渐增加，亦均具有显著性差异(P值均<0.05)。按炎症活动度级别分组，G0组为对照组，G1、G2、G3、G4组的肝组织bFGF面密度较G0组明显增加，其差异具有显著性(P值均<0.05)，而G1-G4组之间两两比较则无显著性差异(P值均>0.05)。结果表明肝脏bFGF表达面积及强度随纤维化程度加重而增加，与炎症活动度关系不密切，但无炎症时，bFGF合成亦不会增加。
2肝组织TGF-β1免疫组化染色观察结果及定量分析结果：TGF-β1染色阳性物质呈棕黄色。S0期未见明显阳性物质，S1、S2期阳性物质主要分布在肝窦壁及窦周细胞、坏死灶及汇管区，着色较浅；S3期、S4期在纤维间隔和肝细胞中均有分布，且着色深，S4期肝细胞内可见大量染色阳性物质。按肝组织纤维化程度期别分组，S0组为对照组，S1、S2、S3、S4组的肝组织TGF-β1的面密度较S0组明显增加，其差异具有显著性(P值均<0.05)，S1-S4组的组间两两比较，TGF-β1的面密度逐渐增加，亦均具有显著性差异(P值均<0.05)。按炎症活动度级别分组，G0组为对照组，G1、G2、G3、G4组的肝组织TGF-β1面密度较GO组明显增加，其差异具有显著性(P值均<0.05)，而G1-G4组之间两两比较则无显著性差异(P值均>0.05)。结果表明肝脏。TGF-β1水平与纤维化程度密切相关，随纤维化程度加重而表达增多，与炎症活动度则无固定关系，但无炎症存在时TGF-β1不会高水平表达。 3肝纤维化不同分期的血清HA、PCⅢ、LN、CⅣ检测结果：S0组为对照组，S1、S2、S3、S4组的血清肝纤指标较S0明显增加，其差异具有显著性(P值均<0.05)，从S1-S4组，血清肝纤指标逐渐增加，除PCⅢ、CⅣ的S1组与S2组比较无显著性差异(P>0.05)外，余各组问两两比较均有显著性差异(P值均<0.05)。
4肝组织bFGF的表达程度与TGF-β1的表达程度呈高度正相关，相关系数为0.895(P<0.05)。肝组织bFGF表达水平与血清HA、PCⅢ、LN、CⅣ之间均呈正相关，相关系数分别为0.705、0.793、0.787、0.621(P值均<0.05)：肝组织TGF-β1的表达水平亦与HA、PCⅢ、LN、CⅣ均呈正相关，相关系数分别为0.724、0.738、0.751、0.685(P值均<0.05)。
5肝组织bFGF与谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)之间无相关性(P值均>0.05)，与总胆红素(TBiL)之间呈弱正相关，相关系数为0.526(P<0.05)，与白蛋白(ALB)、胆碱酯酶(ChE)、凝血酶原活动度(PTA)均呈负相关，相关系数分别为-0.749、-0.783、-0.702(P值均<0.05)。肝组织TGF-β1与ALT、AST之间无相关性(P值均>0.05)，与TBiL之间呈弱正相关，相关系数为0.496(P<0.05)，与ALB、ChE、PTA均呈负相关，相关系数分别为-0.743、-0.758、-0.692(P值均<0.05)。结论：(1)在正常肝组织中的bFGF不表达或仅表达于个别散在的肝细胞浆内及血管内皮细胞，在肝纤维化时表达部位主要集中在血管纤维化间隔及肝窦壁、肝窦内皮细胞等；而TGF-β1在正常肝组织基本不表达，在肝纤维化时表达部位主要在肝细胞中和纤维间隔等。(2)肝脏bFGF及TGF-β1的表达在肝纤维化的启动阶段需要炎症刺激，但肝纤维化进展到一定阶段后，二者与活化的肝星状细胞(HSC)之间形成自分泌环路，促使肝纤维化自行延续，不再依赖于炎症刺激。(3)肝组织bFGF、TGF-β1及血清肝纤四项均能较好反映肝纤维化程度，且相互之间成正相关。(4)测定肝脏bFGF及TGF-β1还能在一定程度上了解慢性肝炎患者的肝脏合成储备功能，以利于判断预后。(5)bFGF与TGF-β1是联系与肝纤维化相关的基质产生细胞及其它细胞因子的枢纽，因此，bFGF及TGF-β1不仅可作为评价肝纤维化严重程度的重要指标之一，同时也为今后以二者为靶点的肝纤维化治疗提供了必要的理论依据。