论文部分内容阅读
目的:将西洋参与松杉灵芝通过双向固体发酵技术进行共培养，测定发酵前后总多糖，总皂苷及单体皂苷的含量变化，探讨大型担子菌与西洋参共培养，单体皂苷的生物转化规律，从而为西洋参资源的进一步开发利用提供理论依据。 方法: 1.采用双向固体发酵技术，将西洋参与松杉灵芝进行发酵培养，以菌丝铺满瓶底的时间最短及长势最优为评价指标，考察发酵工艺中加水量、接种量、微量元素及温度四个因素，确定最适发酵条件。 2.采用紫外分光光度法，测定西洋参发酵前后总多糖及总皂苷的含量变化。 3.采用HPLC法测定西洋参发酵前后各单体皂苷的含量变化，进而研究西洋参发酵过程中单体皂苷的转化规律。 4.采用HPLC法测定指纹图谱，应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004年A版，分别对西洋参发酵前后进行对比，标定共有峰，考察相似度，从而进一步验证西洋参发酵前后成分含量的巨大变化。 5.采用MTT法，以细胞存活率为指标，比较灵芝多糖、西洋参皂苷、西洋参多糖及皂苷等发酵提取物对肿瘤细胞的影响。 结果: 1.西洋参与松杉灵芝共培养，以菌丝铺满瓶底的时间最短及长势最优为评价指标，优选出最适条件:加水量为1∶0.5;接种量为1∶1;最佳微量元素为Ca;发酵温度为28℃。 2.采用紫外分光光度法，测定总多糖由发酵前85.46mg/g增长为140.19mg/g，总皂苷由27.56mg/g增长至52.83mg/g。 3.采用HPLC法测定西洋参发酵前后各单体皂苷的含量变化，发酵前未见西洋参中检测到人参皂苷Rg3，而发酵后则出现大量的人参皂苷Rg3，含量为3.09mg/g;发酵前未检测到人参皂苷Rh1，发酵后检测其含量为0.0662mg/g;发酵前人参皂苷Rh2含量为0.0778mg/g，发酵后增长为0.1664mg/g;发酵前人参皂苷Rb1含量为7.5562mg/g，发酵后Rb1含量为0.2746mg/g;发酵前人参皂苷Re含量高达13.12mg/g，发酵后含量减少为2.46mg/g;人参皂苷Rg1发酵前含量为1.0038mg/g，发酵后含量减少至0.1782mg/g。 4.通过对比西洋参发酵前后指纹图谱，谱图标定的共有峰多达24个，但相似度仅为0.406，说明西洋参发酵前后不仅成分发生了很大的改变，相同成分的含量也存在很大的差异。 5.通过MTT法，观察西洋参发酵前后各组分对肿瘤细胞存活率的影响，得出发酵前灵芝多糖、西洋参总多糖、西洋参总皂苷、西洋参总多糖与总皂苷混合的细胞存活率分别为55％、52％、44％、40％;发酵后总多糖、西洋参总皂苷、总多糖及总皂苷混合的细胞存活率分别为37％;35％;24％。 结论:大型担子菌与西洋参双向固体发酵，会促进西洋参中皂苷类成分的生物转化，产生某些稀有皂苷，同时常见皂苷的含量也发生了巨大的改变，新产生的稀有皂苷对肿瘤细胞的繁殖有一定的抑制作用，从而可以进一步研究，运用于临床实际应用中。本文的研究对人参皂苷的生物转化，西洋参新用途和新制品的开发有较大理论意义及实际应用价值。