【摘 要】
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目的:对真菌14017中能够转化人参皂苷Rb1和Rd的β-D-葡萄糖苷酶进行诱导和纯化，以期得到一种纯度较高的酶，可高效转化Rb1和Rd，并对纯化酶酶学相关性质进行考察以及对该酶转化人
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目的:对真菌14017中能够转化人参皂苷Rb1和Rd的β-D-葡萄糖苷酶进行诱导和纯化，以期得到一种纯度较高的酶，可高效转化Rb1和Rd，并对纯化酶酶学相关性质进行考察以及对该酶转化人参皂苷Rb1和Rd的转化过程进行分析研究。 方法:利用薄层色谱法验证真菌14017转化人参皂苷Rb1的过程。通过pNPG法测定糖苷酶酶活，筛选出酶的来源，并对菌种转化培养基进行优化，确定最佳的方法。通过蛋白质的沉淀和柱层析等一系列纯化方法，从真菌14017的菌体提取液中分离纯化出目的蛋白，并通过生物质谱的手段对该酶定性鉴别。纯化得到的目标糖苷酶，和皂苷底物相作用，通过液质联用等方法分析研究，得到目的蛋白转化人参皂苷的规律。 结果:从真菌14017的发酵液中分离纯化出一种分子量约为120kDa的β-D-葡萄糖苷酶，经过生物质谱鉴定和生物信息学分析之后，发现其同源性最高的已知蛋白酶为β-glucosidase(蛋白编号:A0A179F6W6);本课题所发现的β-D-葡萄糖苷酶能对人参皂苷Rd和Rb1进行转化，其最适反应温度为75℃，最适反应pH为5.0，在该条件下，60min内即可将Rb1几乎全部转化为Rd和F2，总转化率可达92.34％;在6h内，对底物Rd的转化率为30.45％，并对其转化pNPG和人参皂苷Rb1和Rd的酶动力学进行了研究，测定了Km和Vmax值。 结论:通过糖苷酶活性诱导，从真菌14017的发酵液中挖掘提纯得到了一种β-D-葡萄糖苷酶D-1，它能够作用于人参皂苷Rb1和Rd结构中特定位置的糖苷键，产生稀有皂苷Rd和F2，该酶的发现为特定结构稀有皂苷的大规模制备提供了理论依据和技术支持。
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