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深色有隔内生菌(Dark Septate Endophytes,DSE)是一类广泛分布于土壤生态系统中具有重要生态功能的微生物,在陆地生态系统和水生生态系统均有发现,在陆地生态系统的植被恢复和土壤修复过程中发挥重要的作用。本研究在对云南重金属矿区、水生湿地、耕地三种生境中自然生长的植物根中DSE的定殖情况进行调查的基础上,进行分离并得到深色有隔内生真菌(DSE)菌株;通过形态学观察和对核糖体小亚基:ITS1-5.8SrDNA-ITS2序列分析,对这些菌株的系统发育地位进行了分析;从分离到的DSE菌株中,选择形态特征典型的菌株以玉米为宿主植物,进行回接再分离试验,检测DSE菌株在玉米根部的定殖情况并从玉米根部进行分离原接种菌株;用不同浓度的ca2+对分离自不同生境的DSE菌株进行重金属耐(抗)性的初步筛选。研究取得的主要结果如下:
对云南部分重金属矿区、水生湿地、耕地三种生境中92种植物根样进行的DSE和AMF定殖状况调查发现重金属矿区的35种植物、水生湿地中的25种植物、耕地中的32种植物,AMF和DSE的定殖率分别为80%(28种)和86%(30种)、40%(10种)和32%(8种)、81%(26种)和84%(27种)。与陆生植物相比,水生湿地植物的DSE和AMF发生率明显偏低,这说明陆生植物对DSE或AMF具有较高的生存依赖性。
从三种生境中自然生长的植物根内分离得到的不同DSE菌株用PDA培养基培养,根据其形态学特征和ITS1-5.8SrDNA-ITS2序列分析,将其中的ym-1、xs36、hz59-2、mn36等9株鉴定为枝孢菌属(Cladosporiumspp.)(见附录2),hz36-2归为外瓶霉属(Exophialasp.),其它菌株由于鉴定手段的欠缺,仅根据其DNA序列比对还不能将其归为相关属、种。
不同来源的26个DSE菌株中有24株(92%)能够在含40mg/LCd2+的MMN斜面上生长;有19株(73%)能够耐受120mg/LCd2+,表明供试的26个菌株普遍具有Cd2+的耐受性。不同来源的枝孢菌属真菌对低浓度Cd2+的耐受性基本一致,不同来源的枝孢菌对Cd2+的耐受性高于其他供试属的真菌。
枝孢菌属真菌菌株的玉米回接再分离实验表明,枝孢菌属的部分种类在玉根系成功定殖后,能形成典型的DSE形态学特征,但不引起植物病症,且能从玉米根部能够分离到原接种菌株,初步认为枝孢菌属的某些种类应属于DSE的范筹,从而拓展了DSE属种的范围。