回心草活性单体RR7的抗心肌缺血作用及机制研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinxinde1986
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滇产回心草(真藓科植物大叶藓Rhodobryum roseum Limp.)为云南省多民族共用的传统草药,以彝族、景颇族、纳西族等为主,常单用或同大枣、胡椒、猪心等配伍用水煎煮成汤剂服用治疗心脏病(心痛、心慌、心悸、气短)等。鉴于回心草确切的临床疗效,结合本课题组前期对回心草初步的药理作用及试验结果分析推测,回心草乙酸乙酯活性部位提取物及其从中分离出的RR7(胡椒碱)在心脏疾病中发挥着重要的作用,并推测其有明显的抗氧化作用与抗心肌缺血作用,尤其实验应用回心草制剂(多为水提物)及动物实验中未发现有任何明显毒副作用。为进一步阐明回心草活性物质及其分离出的RR7的作用机制,本文采用药理和分子相结合的方法,对其作用机制进行系统的研究。在经典的动物常压耐缺氧模型、断头实验以及特异性缺氧模型中,RR7明显提高动物耐缺氧能力,延长其存活时间,具有明显的抗心肌缺血与抗脑缺氧的保护作用,并有剂量依赖性;针对RR7的抗缺氧作用我们采用垂体后叶素诱导建立特异性心肌缺血模型,在垂体后叶素诱导的心肌缺血模型上,RR7的低、中、高剂量对心肌与血清的抗氧化酶水平有明显影响,可升高SOD、降低MDA,提示是其抗心肌缺血的机理之一。在急性心肌缺血性疾病中,治疗的直接目的是防治心肌细胞坏死,以往的评价方法不能观察心肌细胞的存活情况,主要是过氧化氢的浓度过低不能直接导致心肌细胞死亡,浓度太高则会将细胞全部杀死,无法观察药物作用。本研究成功建立了MTT的方法检测原代培养乳鼠心肌细胞损伤模型,并采用此模型评价了RR7的细胞保护作用,结果表明,低剂量的阳性药心得安,中、高剂量的RR7均可以有效的保护过氧化氢损伤的心肌细胞,并呈现出剂量依赖关系;提示RR7可能是通过抗氧化作用机制来完成的。进一步采用过氧化氢损伤心肌细胞线粒体的模型,观察RR7对其保护作用的影响。RR7可升高超氧化物歧化酶SOD、GSH、AST;减少线粒体MDA的生成和依赖ATP的Na+-K+ATP酶和Ca2+ATP酶活性。因而RR7缓解心肌线粒体的氧化损伤,是其抗心肌缺血及心肌保护作用机制之一。在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血模型的心电图与病理心肌组织上,RR7表现出明显的抗心律失常作用;可以明显改善受损的心肌组织,电镜检测表明,RR7组动物心肌的不完整心肌纤维、空泡化明显减少;心肌细胞玻璃样坏死同样明显减少。β受体是参与心脏功能活动最重要的受体,为了进一步阐明RR7对心肌β受体的作用及其抗心肌缺血的保护作用与β受体的关系,本文观察了RR7对β受体蛋白表达的影响,实验结果显示,异丙肾上腺素损伤组可以明显增强β受体蛋白的表达(P<0.01),RR7组抑制了β受体蛋白表达的增强(P<0.01)。我们还发现,小剂量RR7作用于心肌时,明显抑制β受体蛋白表达的增强,但大剂量RR7抑制β受体蛋白表达增强的作用减弱;同时,在心电图实验研究中发现,RR7随着剂量的增加,心率增加、T波振幅增大,β1受体基因表达也随之增加。由此我们推测,当RR7小剂量时,可以起到β受体阻断的作用,从而起到抗心肌缺血、保护心肌的作用,但是随着剂量增加后,作用则会相反。RR7对心肌β受体的影响及对心肌缺血保护作用的研究至关重要,有待于我们进一步的研究。
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