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金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一种广谱虫生真菌,在生物防治中有重要的应用价值.固态发酵具有设备投资少、能耗低、污染少容易操作等特点,非常适用于金龟子绿僵菌的大规模培养和生产.该论文对筛选出来的高产孢金龟子绿僵菌M.2,进行菌体萌发产孢的观察,优化了麸皮—玉米粉琼脂高孢平板培养基和甘蔗渣培养基,并用自行设计的固态发酵反应器进行固态发酵扩大培养控制参数的研究,取得了较满意的结果.1.对广州市微生物研究所提供的混合金龟子绿僵菌进行筛选,筛选出M.2高产孢菌,培养皿培养的产孢量达7.53×10<10>个孢子/平板,在麸皮培养基上为2.87×10<9>个孢子/g干培养基.2.对筛选出的M.2进行了固态发酵过程中二氧化碳、氨基葡糖、菌体量和底物干重减重的测定.通过检测固态发酵物中氨基葡糖含量推算菌体量,另外,通过底物干重减重方法可以定性评估生物体生长状况.3.优化麸皮—玉米粉琼脂平板培养基,得到高产孢的培养基配方:基料为麸皮50g/L、玉米粉10g/L;无机离子的最优水平为KH<,2>PO<,4>2g/L、MgSO<,4>1.5g/L、CuSO<,4>15mg/L.收集的孢子粉测得其含水量为11.37﹪,孢子粉含孢量为1.6×10<13>个孢子/g孢子粉,孢子粉的萌发率为97.6﹪.4.选取甘蔗渣为固态培养基基料,经过单因次和正交试验得到优化配方:70﹪甘蔗渣,30﹪玉米粉,初始加水量40﹪,KH<,2>PO<,4>0.1﹪、MgSO<,4>0.5﹪、CuSO<,4>150ppm.用优化的甘蔗渣培养基培养金龟子绿僵菌,产孢量达到5.1×10<10>个孢子/g干培养基.5.根据固态发酵反应器设计原理,设计总体积为10.7L的生物反应器,底部为无菌蓄水池,填料层为7.6L,采用正向通风,空气先经过底部水浴区后,接近为饱和的湿空气,再进入料层保证发酵前期高湿,后期低湿.6.利用麸皮固态培养基进行金龟子绿僵菌固态发酵扩大培养,并对过程参数进行研究.最终确定过程控制参数为通入空气控温20℃,初始含水量为55﹪,采用变通风量,0~12小时不通风、12~24小时通风率为3.28vvm、24~60小时通风率为3.93vvm、60~96小时通风率为3.28vvm、96~120小时通风率为2.62vvm,每12小时搅拌一次,发酵96小时收集孢子.在最优条件下,金龟子绿僵菌固态发酵最终的产孢量为1.08×10<11>个孢子/克干培养基.