【摘 要】
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目的:探讨褪黑素(melatonin,MLT)是否可通过ERK/MAPK通路调控动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型兔动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase ,MLCK)的表
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目的:探讨褪黑素(melatonin,MLT)是否可通过ERK/MAPK通路调控动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型兔动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase ,MLCK)的表达。方法:复制兔AS模型,分析血清中各种脂质成分及相关生化指标的动态变化;γ-32P-ATP掺入法测定模型兔主动脉的MLCK活性;动脉经O.C.T包埋、冰冻切片,免疫荧光检测动脉内膜通透性的变化,同时用免疫组化检测动脉内膜MLCK的表达,HE染色观察动脉壁的形态结构; Western blot检测AS兔动脉组织MLCK的表达和ERK磷酸化水平;ox-LDL作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分析MLCK转录和表达。结果:动脉粥样硬化兔模型复制成功,新西兰大耳白兔在高胆固醇饮食1周、2周、3周、4周后,与正常对照相比血清中甘油三酯(triglyceride,TG),胆固醇(cholesterol,CHO),高密度脂蛋白(high—density lipoprotein,HDL)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)含量显著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.01);而高胆固醇饮食8周时,测定的血清TG、CHO、HDL、LDL含量和4周相比增加不明显;高胆固醇饮食12周时,测定的血清TG、CHO和LDL含量和8周相比有所下降;高胆固醇饮食8周加喂MLT,与高胆固醇饮食组相比血清中TG、CHO和LDL含量下降。模型兔高胆固醇饮食1周、2周、3周、4周、8周、12周后,免疫荧光显示主动脉内膜通透性与正常对照相比呈逐渐增强趋势,Western blot和免疫组化则显示动脉内皮细胞MLCK的表达、ERK磷酸化水平与正常对照相比呈逐渐增强趋势,γ-32P-ATP掺入法显示动脉组织中MLCK的活性与正常对照相比呈逐渐增强趋势(P<0.05),而加喂MLT后,动脉组织MLCK的表达、ERK磷酸化水平及MLCK的活性和主动脉内膜通透性均有所下降。HE染色显示,高胆固醇饮食1周、2周、3周、4周、8周的兔主动脉内膜逐渐增厚,细胞间隙逐渐增大,高胆固醇饮食4周开始出现有少量泡沫细胞形成,高胆固醇饮食8周时泡沫细胞的量增多,至高胆固醇饮食12周时则形成了明显的动脉粥样硬化斑块,斑块表面有一层纤维帽,而加喂MLT后,主动脉内膜病变则有一定程度减轻。结论:提示在AS发生发展过程中,动脉内膜屏障完整性的改变可能与MLCK活性增强相关;AS模型兔主动脉组织中MLCK表达与ERK磷酸化呈现一致性。MLT可能通过ERK/MAPK通路下调模型兔动脉内皮细胞MLCK活性而减轻AS斑块的病变程度。
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