【摘 要】
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目的:应用噬菌体展示技术构建人抗体组合文库.筛选抗人D二聚体单克隆抗体. 方法:首先对辅助噬茵体扩增及定量条件进行了研究,通过微量菌斑形成实验鉴定其敏感性,再用于测定辅
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目的:应用噬菌体展示技术构建人抗体组合文库.筛选抗人D二聚体单克隆抗体. 方法:首先对辅助噬茵体扩增及定量条件进行了研究,通过微量菌斑形成实验鉴定其敏感性,再用于测定辅助噬菌体滴度;从不同人群外周血淋巴细胞中提取总RNA,经反转录后,以免疫球蛋白信号肽序列引物和家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物,进行半套式PCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于Pcomb3H载体,电转化大肠杆菌XL1-blue,在辅助噬菌体的超感染下,构建噬菌体抗体组合文库;以固相化抗原淘筛抗体库, ELISA鉴定噬菌体抗体. 结果:50对免疫球蛋白引物全部能扩增出目的片段;经数次电转化构建了库容为2.8× 10<8>的抗体库,滴度为4.1×I0<14>PFU /ml,Fab基因重组率为46﹪.以人D二聚体标准品为抗原富集2轮,可出现特异性富集;筛选出的阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达. 结论:成功构建了人源噬菌体抗体组合文库,从中获得抗D二聚体的特异性人源单克隆抗体.
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