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目的:苦参碱是从中药苦参根中提取的生物碱,本实验将苦参碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖的抑制作用及其相关机制进行研究,探讨苦参碱应用于视网膜母细胞瘤治疗的前景。
方法:
(1)体外培养Y79、WERI—RB1和SO-Rb50这三株视网膜母细胞瘤细胞。CCK-8法测定0.2～1.1mg/ml苦参碱作用于三株细胞24h后对细胞增殖的抑制情况,并分别计算得出半数抑制浓度(IC50浓度)。然后对三株细胞未加药组和IC50浓度的苦参碱作用12h、24h和48h后组,①通过流式细胞仪分别测定其细胞周期的改变情况；②通过TUNEL法分别测定其细胞凋亡率并进行荧光染色定位观察；③通过Western-Blot检测细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达水平；④通过透射电镜观察细胞超微结构改变。
(2)体外培养非耐药细胞株SO-Rb50和耐药细胞株SO-Rb50/VCR细胞,CCK-8法测定0.2～1.1mg/ml苦参碱作用于两株细胞24h后对细胞增殖的抑制作用。
结果:
(1)视网膜母细胞瘤细胞体外培养下呈悬浮生长。在加入0.2—1.1mg/ml苦参碱24小时后,Y79、WERI-RB1和SO-Rb50细胞的增殖抑制率随苦参碱的浓度增加而提高,半数抑制浓度(IC50值)分别为Y79:0.3±0.02 mg/mL,WERI-RB1:0.66±0.12mg/ml,SO—Rb50:0.96±0.04 mg/mL。与未加药细胞相比,IC50浓度苦参碱作用12h、24h和48h后的三株细胞中:①G0—G1期细胞比例显著增高,同时S期的细胞比例显著下降。②细胞的凋亡率明显增加,TUNEL和DAPI染色证实在细胞核发生DNA断裂。③通过Western Blot实验检测出细胞周期相关蛋白P21和P27表达水平上调,cyclinD1表达水平下调；细胞凋亡相关蛋白bcl-2表达水平下调而bax表达水平上调,细胞株β—action表达各组之间没有差异。④电子显微镜下可见到较为明显的细胞变性和细胞凋亡发生。
(2)在加入0.2-1.1mg/ml苦参碱24小时后,非耐药细胞株SO—Rb50和耐药细胞株SO—Rb50/VCR细胞的增殖抑制率相似,其半数抑制浓度(IC50浓度)分别为SO-Rb50:0.96±0.04 mg/mL,SO-Rb50/VCR:0.97±0.08 mg/ml。
结论:苦参碱对体外培养的视网膜母细胞瘤细胞的增殖有抑制作用,这种作用呈浓度依赖性,其作用机制与细胞周期调控和诱导细胞凋亡有关；苦参碱还对耐长春新碱的视网膜母细胞瘤细胞的增殖有同样的抑制作用。