细菌杀藻素SP48A胁迫下塔玛亚历山大藻生理生化变化及蛋白表达差异研究

• 作 者: 原雅纬
• 机 构: 河南师范大学
• 出 处: 河南师范大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: 塔玛亚历山大藻 细菌杀藻素SP48A 生理生化 蛋白表达差异

本论文以塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)为主要研究对象,选用一株杀藻菌SP48(Pseudoalteromonas sp.SP48)的冻干粉作为杀藻物质SP48A,将其添加于无菌塔玛亚历山大藻培养体系中,研究SP48A胁迫下塔玛亚历山大藻生理生化的变化,并运用双向电泳技术研究塔玛亚历山大藻藻蛋白对SP48A的响应,捕捉在杀藻物质诱导下藻体蛋白的特意表达,为研究SP48A对塔玛亚历山大藻的杀藻机制以及杀藻细菌应用于海洋赤潮的生物防治奠定理论基础。主要研究结果如下:　　
(1)建立了以SP48A-塔玛亚历山大藻胁迫系统,发现在培养12天(对数生长期后期)的塔玛亚历山大藻培养液中,加入2.15mg mL-1的SP48A溶液,并培养24h,此时取藻培养液为理想的研究体系。　　
(2)利用以上研究体系,研究杀藻物质SP48A对塔玛亚历山大藻生理生化性质的影响。研究发现,在SP48A的胁迫下,塔玛亚历山大藻的生理生化性质发生了很大的改变。藻细胞蛋白含量明显下降,藻细胞中的SOD活力、过氧化氢酶活力、MDA和超氧阴离子含量均明显上升。说明杀藻物质SP48A对藻细胞造成了多方面的损伤,使过氧化物大量产生并在体内累积,自由基积累以及发生膜脂过氧化作用。这些均与SP48A干扰藻细胞重要生理代谢过程相关。　　
(3)建立了适合于塔玛亚历山大藻的蛋白提取方法。分别对藻细胞的细胞破碎方法,提取藻蛋白的方法以及不同的水化液等条件做了比较和优化,即以超声破碎法(最大功率的8％,作用时间为2s,间隔3s,循环60次)将藻细胞破碎,以Lysis buffer法提取藻蛋白,并用含有8M urea的水化液使蛋白粉末重新溶解,继而跑双向电泳。　　
(4)以正常生长的塔玛亚历山大藻蛋白为对照,比较分析了加入含有半致死量(LD50)的杀藻物质的藻蛋白的表达差异,所得图谱通过软件比较分析后,找到两者之间存在20个差异蛋白点。其中有4个蛋白的表达量上调,其余蛋白表达量均下调。