【摘 要】
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该研究用189对鸡的微卫星引物在孔雀基因组DNA中进行扩增,发现其中159对引物得到了PCR产物,占84.1％(159/189);119对引物的PCR产物为特异性扩增产物,占74.8％(119/159).通过同一
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该研究用189对鸡的微卫星引物在孔雀基因组DNA中进行扩增,发现其中159对引物得到了PCR产物,占84.1％(159/189);119对引物的PCR产物为特异性扩增产物,占74.8％(119/159).通过同一位点来自鸡与孔雀的序列的比对,发现其中具同源性的比率为68.2％(30/44).对可得到扩增产物的引物以孔雀基因池为模板进行多态性分析,结果发现83个座位(52.2％)无多态性,9个位点含有5个和5个以上等位基因,平均等位基因数为1.93个.另外,从所构建的孔雀富集微卫星文库中挑选出18条微卫星序列设计引物,在鸡中进行扩增,发现可得到PCR产物的占83.3％(15/18),其中9条引物在鸡中可得到特异性扩增产物,占60％(9/15).经测序发现5条与孔雀的相应序列有同源性,占71.4％(5/7).结果表明鸡和孔雀的微卫星引物分别在孔雀和鸡中的扩增成功率、特异性产物所占比例和PCR产物中含有微卫星的比例是一致的,同时也说明微卫星引物在孔雀与鸡中进行种间扩增可行.该研究还利用生物素标记的寡核苷酸探针biotin-(CA)<,12>,biotin-(CCG)<,8>,biotin-(CAG)<,8>,biotin-(TTTC)<,6>构建了富集微卫星文库.富集处理包括:在300-1000bp酶切片段两端连接接头;链亲和素磁珠与生物素标记探针的复合物新和捕捉片段重复区域;洗脱得到含四种重复的单链目的片段;以21-mer接头寡聚核苷酸为引物进行PCR扩增以获得双链目的片段,连接至T载体,转化到大肠杆菌DH-5α中,构建成孔雀富集微卫星文库.抽样检测结果表明,通过富集处理,富集文库阳性克隆率提高到了74.0％,与常规文库相比(0.4％),提高了近200倍,而且所用时间少成本低.我们分离的微卫星标记将对孔雀遗传作图、系谱检测以及研究孔雀与其它物种间的进化关系研究具有重要意义.
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