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目的：（1）建立丹葛酚酮胶囊的HPLC指纹图谱，同时测定其中9种主要成分的含量，完善提升丹葛酚酮胶囊的质量标准。（2）采用UPLC-MS/MS对丹葛酚酮提取物大鼠血浆中移行成分进行分析鉴定，为药动学和体内药效物质基础研究提供参考。（3）建立丹葛酚酮提取物中8种主要成分在大鼠血浆中药物浓度的分析方法，开展药代动力学研究，阐明主要药动学参数，揭示丹参葛根对药配伍的作用机制，为临床用药提供参考。
方法：（1）采用Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），0.05%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长280 nm，柱温30℃，进样量10μL，建立10批丹葛酚酮胶囊的 HPLC指纹图谱，并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2012版）进行相似度评价。同时测定10批丹葛酚酮胶囊中9种成分的含量。（2）收集SD大鼠单次灌胃丹葛酚酮提取物30 min血浆样品，采用 Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8μm），以0.05%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相系统进行梯度洗脱，柱温35℃，流速0.2 mL·min-1，采用电喷雾离子源， MS和MS/MS扫描模式进行正、负离子检测，分析大鼠血浆中的原型成分和代谢产物。（3）SD大鼠单剂量灌胃丹葛酚酮提取物、丹参酚酮提取物、葛根黄酮提取物，采集24 h内不同时间点的血浆样品，经蛋白沉淀法处理后，以Eclipse plus C18（2.1 mm×50 mm，1.8μm）为色谱柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾离子源以多反应监测模式进行正负离子分段检测。采用DAS3.2.2软件进行非房室模型拟合，计算8个主要成分药代动力学参数。
结果：（1）建立了丹葛酚酮胶囊HPLC指纹图谱，共标定出28个共有峰，经与对照品比对指认了16个色谱峰，10批丹葛酚酮胶囊的相似度均大于0.99。含量测定方法经线性、精密度、稳定性、重复性和加样回收考察符合定量分析要求，10批丹葛酚酮胶囊中3′-羟基葛根素、葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量分别为9.01-12.44，53.98-65.39，13.89-15.51，13.24-19.43，14.15-18.44，58.24-75.68，2.03-2.63，1.09-1.45，2.93-3.72 mg/粒。（2）通过与空白生物样品、阴性生物样品、体外样品的提取离子色谱图、质谱碎片裂解信息比对，结合对照品信息，在大鼠血浆中共鉴定出34个移行成分，其中包括13个原型成分和21个代谢产物，主要代谢途径为羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化等。（3）8种成分的线性相关系数均大于0.99，血浆样品室温放置4 h、血浆样品处理后室温放置12 h、-80℃放置10天以及反复冻融3次的日内、日间精密度小于11%，精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求，适用于丹葛酚酮提取物中8种成分的药动学研究。与灌胃单方丹参酚酮和葛根黄酮提取物相比，灌胃复方丹葛酚酮提取物后大鼠血浆中葛根黄酮和丹参酮成分AUC及Cmax均显著增加；血浆中丹酚酸B的各项药动学参数无显著差异（P＞0.05）。
结论：（1）HPLC指纹图谱结合多成分含量测定方法可行，操作简单，结果准确、稳定，完善提升了丹葛酚酮胶囊的质量标准。（2）建立的UPLC-MS/MS分析可为丹葛酚酮提取物在血浆中移行成分的定性分析提供一种快速、简单、可靠的分析手段，为药代动力学及药效物质基础研究提供技术方法。（3）丹参葛根有效组分配伍具有明显的优势和特点，可显著提高葛根黄酮和丹参酮成分的血药浓度。该研究结果不仅为丹参葛根对药配伍理论提供了科学阐释，而且为丹葛酚酮胶囊的临床研究和应用提供了参考。
方法：（1）采用Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），0.05%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长280 nm，柱温30℃，进样量10μL，建立10批丹葛酚酮胶囊的 HPLC指纹图谱，并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2012版）进行相似度评价。同时测定10批丹葛酚酮胶囊中9种成分的含量。（2）收集SD大鼠单次灌胃丹葛酚酮提取物30 min血浆样品，采用 Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8μm），以0.05%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相系统进行梯度洗脱，柱温35℃，流速0.2 mL·min-1，采用电喷雾离子源， MS和MS/MS扫描模式进行正、负离子检测，分析大鼠血浆中的原型成分和代谢产物。（3）SD大鼠单剂量灌胃丹葛酚酮提取物、丹参酚酮提取物、葛根黄酮提取物，采集24 h内不同时间点的血浆样品，经蛋白沉淀法处理后，以Eclipse plus C18（2.1 mm×50 mm，1.8μm）为色谱柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾离子源以多反应监测模式进行正负离子分段检测。采用DAS3.2.2软件进行非房室模型拟合，计算8个主要成分药代动力学参数。
结果：（1）建立了丹葛酚酮胶囊HPLC指纹图谱，共标定出28个共有峰，经与对照品比对指认了16个色谱峰，10批丹葛酚酮胶囊的相似度均大于0.99。含量测定方法经线性、精密度、稳定性、重复性和加样回收考察符合定量分析要求，10批丹葛酚酮胶囊中3′-羟基葛根素、葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量分别为9.01-12.44，53.98-65.39，13.89-15.51，13.24-19.43，14.15-18.44，58.24-75.68，2.03-2.63，1.09-1.45，2.93-3.72 mg/粒。（2）通过与空白生物样品、阴性生物样品、体外样品的提取离子色谱图、质谱碎片裂解信息比对，结合对照品信息，在大鼠血浆中共鉴定出34个移行成分，其中包括13个原型成分和21个代谢产物，主要代谢途径为羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化等。（3）8种成分的线性相关系数均大于0.99，血浆样品室温放置4 h、血浆样品处理后室温放置12 h、-80℃放置10天以及反复冻融3次的日内、日间精密度小于11%，精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求，适用于丹葛酚酮提取物中8种成分的药动学研究。与灌胃单方丹参酚酮和葛根黄酮提取物相比，灌胃复方丹葛酚酮提取物后大鼠血浆中葛根黄酮和丹参酮成分AUC及Cmax均显著增加；血浆中丹酚酸B的各项药动学参数无显著差异（P＞0.05）。
结论：（1）HPLC指纹图谱结合多成分含量测定方法可行，操作简单，结果准确、稳定，完善提升了丹葛酚酮胶囊的质量标准。（2）建立的UPLC-MS/MS分析可为丹葛酚酮提取物在血浆中移行成分的定性分析提供一种快速、简单、可靠的分析手段，为药代动力学及药效物质基础研究提供技术方法。（3）丹参葛根有效组分配伍具有明显的优势和特点，可显著提高葛根黄酮和丹参酮成分的血药浓度。该研究结果不仅为丹参葛根对药配伍理论提供了科学阐释，而且为丹葛酚酮胶囊的临床研究和应用提供了参考。