论文部分内容阅读
目的：
基于《黄帝内经》“甘生脾”理论，我院儿科在临床上使用小建中汤治疗脾虚泄泻常获得满意效果。为探索小建中汤治疗脾虚泄泻的作用机制，现选用“苦寒泻下法”建立脾虚泄泻幼鼠模型，通过与正常幼鼠进行比较，观察脾虚泄泻幼鼠肠道菌群和肠粘膜免疫功能的变化。运用小建中汤对脾虚泄泻幼鼠进行干预，分析小建中汤对脾虚泄泻幼鼠肠道菌群及肠粘膜免疫功能的影响，以期为小建中汤治疗脾虚泄泻提供实验室依据。
方法：
将48只幼鼠随机分为2组，正常组12只（A组），造模组36只。模拟大黄苦寒泻下法建立脾虚泄泻模型，随后将造模成功的幼鼠随机分为3组，脾虚泄泻组（B组）、小建中汤高剂量组（C组）、小建中汤低剂量组（D组），每组12只。在干预期，正常组及脾虚泄泻组予以灌胃生理盐水，小建中汤组予以灌胃小建中汤药液，周期为10天。观察幼鼠的精神、皮毛、饮食、体重、活动度及大便性状。治疗后取幼鼠盲肠进行16s rDNA高通量测序检测肠道菌群的结构组成与丰富度变化，取幼鼠小肠组织采用酶联免疫吸附实验（ELISA）进行SIgA检测。
结果：
1、本研究成功的复制了脾虚泄泻幼鼠模型，发现脾虚泄泻组幼鼠与正常组相比，胸腺指数、脾腺指数、肠粘膜组织SIgA的水平均显著降低（P＜0.05）；小建中汤干预后，与脾虚泄泻组相比，小建中汤高、低剂量组幼鼠的一般情况改善，体重及胸腺指数均显著增加（P＜0.05）。小建中汤高剂量组能有效改善脾指数（P＜0.05），但低剂量组无意义（P＞0.05）。小建中汤高、低剂量均可提升的肠粘膜SIgA水平（P＜0.05），而高剂量的上调作用优于低剂量组（P＜0.05）。
2、16S rDNA高通量测序结果：
（1）肠道菌群的组成：四组幼鼠的盲肠菌群结构，在门水平上以拟杆菌门、厚壁菌门占例最大，为优势菌群。
（2）组间差异物种的比较：
与正常幼鼠相比，在门水平上，脾虚泄泻幼鼠拟杆菌门、变形菌门、芽单胞菌门水平明显减少（P＜0.05），放线菌门比例减少，但不显著（P＞0.05）；Epsilonbacteraeota、柔壁菌门比例明显增加（P＜0.05）。在属水平上，拟杆菌属、理研菌属、拟普雷沃菌属水平显著降低（P＜0.05），螺杆菌属水平明显上升（P＜0.05），大肠埃希菌数量也有所增加，但不显著（P＞0.05）。
与脾虚泄泻组相比，小建中汤可以促使拟杆菌门、变形杆菌门、酸杆菌门、放线菌门、芽单胞菌门的生长（P＜0.05），而抑制Epsilonbacteraeota、柔壁菌门增长（P＜0.05）。小建中汤高剂量促进芽单胞菌门细菌生长的作用优于低剂量组（P＜0.05）。在属水平上，小建中汤可以促进拟杆菌属、理研菌属、拟普雷沃菌属的生长（P＜0.05），而抑制螺杆菌属、大肠埃希菌属的生长（P＜0.05），小建中高剂量促进拟普雷沃菌属生长的作用优于比小建中汤低剂量（P＜0.05）。
与正常组相比，在门水平及属水平上，小建中汤均可以促使失调的菌群恢复趋于正常水平。且小建中汤可以促使酸杆菌门细菌显著增长，高出正常组水平（P＜0.05）。
结论：
1、采用生大黄水煎液灌胃，可以成功建立脾虚泄泻幼鼠模型。脾虚泄泻幼鼠肠粘膜分泌的SIgA水平下降，肠道菌群结构与组成发生改变，菌群多样性下降。
2、小建中汤能改善脾虚泄泻幼鼠的脾虚证候，促使体重增长，使萎缩的胸腺、脾脏增长，提高肠粘膜SIgA的分泌水平。
3、小建中汤能够促进有益菌的生长，抑制致病菌的增殖，使紊乱的菌群结构恢复趋于正常水平，同时提高肠粘膜免疫功能可能是治疗脾虚泄泻的机制之一。小建中汤仲景原方剂量（高剂量）在改善脾虚泄泻幼鼠肠粘膜免疫方面作用优于现代教材推荐剂量（低剂量），小建中汤仲景原方剂量对芽单胞菌门、拟普雷沃菌属的调节作用优于现代教材推荐剂量。
基于《黄帝内经》“甘生脾”理论，我院儿科在临床上使用小建中汤治疗脾虚泄泻常获得满意效果。为探索小建中汤治疗脾虚泄泻的作用机制，现选用“苦寒泻下法”建立脾虚泄泻幼鼠模型，通过与正常幼鼠进行比较，观察脾虚泄泻幼鼠肠道菌群和肠粘膜免疫功能的变化。运用小建中汤对脾虚泄泻幼鼠进行干预，分析小建中汤对脾虚泄泻幼鼠肠道菌群及肠粘膜免疫功能的影响，以期为小建中汤治疗脾虚泄泻提供实验室依据。
方法：
将48只幼鼠随机分为2组，正常组12只（A组），造模组36只。模拟大黄苦寒泻下法建立脾虚泄泻模型，随后将造模成功的幼鼠随机分为3组，脾虚泄泻组（B组）、小建中汤高剂量组（C组）、小建中汤低剂量组（D组），每组12只。在干预期，正常组及脾虚泄泻组予以灌胃生理盐水，小建中汤组予以灌胃小建中汤药液，周期为10天。观察幼鼠的精神、皮毛、饮食、体重、活动度及大便性状。治疗后取幼鼠盲肠进行16s rDNA高通量测序检测肠道菌群的结构组成与丰富度变化，取幼鼠小肠组织采用酶联免疫吸附实验（ELISA）进行SIgA检测。
结果：
1、本研究成功的复制了脾虚泄泻幼鼠模型，发现脾虚泄泻组幼鼠与正常组相比，胸腺指数、脾腺指数、肠粘膜组织SIgA的水平均显著降低（P＜0.05）；小建中汤干预后，与脾虚泄泻组相比，小建中汤高、低剂量组幼鼠的一般情况改善，体重及胸腺指数均显著增加（P＜0.05）。小建中汤高剂量组能有效改善脾指数（P＜0.05），但低剂量组无意义（P＞0.05）。小建中汤高、低剂量均可提升的肠粘膜SIgA水平（P＜0.05），而高剂量的上调作用优于低剂量组（P＜0.05）。
2、16S rDNA高通量测序结果：
（1）肠道菌群的组成：四组幼鼠的盲肠菌群结构，在门水平上以拟杆菌门、厚壁菌门占例最大，为优势菌群。
（2）组间差异物种的比较：
与正常幼鼠相比，在门水平上，脾虚泄泻幼鼠拟杆菌门、变形菌门、芽单胞菌门水平明显减少（P＜0.05），放线菌门比例减少，但不显著（P＞0.05）；Epsilonbacteraeota、柔壁菌门比例明显增加（P＜0.05）。在属水平上，拟杆菌属、理研菌属、拟普雷沃菌属水平显著降低（P＜0.05），螺杆菌属水平明显上升（P＜0.05），大肠埃希菌数量也有所增加，但不显著（P＞0.05）。
与脾虚泄泻组相比，小建中汤可以促使拟杆菌门、变形杆菌门、酸杆菌门、放线菌门、芽单胞菌门的生长（P＜0.05），而抑制Epsilonbacteraeota、柔壁菌门增长（P＜0.05）。小建中汤高剂量促进芽单胞菌门细菌生长的作用优于低剂量组（P＜0.05）。在属水平上，小建中汤可以促进拟杆菌属、理研菌属、拟普雷沃菌属的生长（P＜0.05），而抑制螺杆菌属、大肠埃希菌属的生长（P＜0.05），小建中高剂量促进拟普雷沃菌属生长的作用优于比小建中汤低剂量（P＜0.05）。
与正常组相比，在门水平及属水平上，小建中汤均可以促使失调的菌群恢复趋于正常水平。且小建中汤可以促使酸杆菌门细菌显著增长，高出正常组水平（P＜0.05）。
结论：
1、采用生大黄水煎液灌胃，可以成功建立脾虚泄泻幼鼠模型。脾虚泄泻幼鼠肠粘膜分泌的SIgA水平下降，肠道菌群结构与组成发生改变，菌群多样性下降。
2、小建中汤能改善脾虚泄泻幼鼠的脾虚证候，促使体重增长，使萎缩的胸腺、脾脏增长，提高肠粘膜SIgA的分泌水平。
3、小建中汤能够促进有益菌的生长，抑制致病菌的增殖，使紊乱的菌群结构恢复趋于正常水平，同时提高肠粘膜免疫功能可能是治疗脾虚泄泻的机制之一。小建中汤仲景原方剂量（高剂量）在改善脾虚泄泻幼鼠肠粘膜免疫方面作用优于现代教材推荐剂量（低剂量），小建中汤仲景原方剂量对芽单胞菌门、拟普雷沃菌属的调节作用优于现代教材推荐剂量。