【摘 要】
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单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(Single-chain urokinase-type Plasminogen Activator、scu-PA)是一种新型溶栓药物,主要激活纤维蛋白表面的纤溶酶原,选择性地溶解血栓.scuPA
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(Single-chain urokinase-type Plasminogen Activator、scu-PA)是一种新型溶栓药物,主要激活纤维蛋白表面的纤溶酶原,选择性地溶解血栓.scuPA被纤溶酶(Plasmin)等在Lysl58-Ile159间切开,变为尿激酶(Urokinase,UK).scu-PA与UK在一级结构上的唯一区别就在于这一肽键断裂与否.该研究模拟两者的区别位点,设计合成了跨越这一肽键的13肽(Thr-Leu-arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-Gly-Gly-Glu-Cys),并与载体蛋白KLH偶联,免疫Balb/c小鼠.取其脾细胞采用Kohler和Milstein的B淋巴细胞融合技术与Sp2/0细胞融合,间接ELISA法筛选得到3株分必仅与scu-PA反应而不与UK及其结构类似物反应的单抗的细胞株,分别命名为1NFB<,3>、1NFC<,1>和2NFC<,2>.然后,小鼠腹腔注射杂交瘤细胞制备腹水,用Proten G Sepharose 4B Fast Flow亲和柱纯化,经SDS-PAGE分析后扫描鉴定,纯度超过99%.再将纯化的单抗与CNBr活化的Sepharose 4B交联制备免疫亲和层析柱,纯化scu-PA.经此一步,样品纯度达100%,单链比例由14.37%提高到91.31%,比活性提高2.7倍,活性回收率为29.3%此纯化方法的进一步扩大和完善将有助于scu-PA纯化工艺的优化.该课题宜做更深入的研究.
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