【摘 要】
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目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导肝癌细胞凋亡的机制,为临床肝癌防治提供理论依据。方法实验采用MTT检测EGCG对体外培养HepG2细胞增殖的影响;LDH检测试剂盒检测E
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目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导肝癌细胞凋亡的机制,为临床肝癌防治提供理论依据。方法实验采用MTT检测EGCG对体外培养HepG2细胞增殖的影响;LDH检测试剂盒检测EGCG对体外培养HepG2细胞毒性;通过PI单染法流式细胞仪检测EGCG诱导的HepG2细胞凋亡。RT-PCR检测EGCG作用24小时后p38MAPK及Caspase-8的mRNA表达差异及Western blot检测EGCG作用HepG2细胞24小时后,磷酸化的p38MAPK及Caspase-8的蛋白水平表达差异。结果20、40、60、80、100、120、140及160μmol/L的EGCG对体外培养的HepG2细胞均有抑制效应,但80、100、120及140μmol/L的EGCG处理组细胞上清液中LDH活性与无EGCG药物处理对照组比较,差异有显著性,提示大于60μmol/L的EGCG处理体外培养HepG2细胞会产生细胞毒性引起细胞死亡,因此,我们选用20、40、60μmol/L的EGCG做后续的实验。20、40和60μmol/L的EGCG对体外培养的HepG2细胞的抑制率分别为26.9%、48.1%及65.4%;相应浓度的EGCG作用24h后,可诱导体外培养HepG2细胞凋亡,流式细胞仪检测20、40及60μmol/L的EGCG诱导凋亡率分别为3.6%、15.2%、及31.3%,与对照组比较,差异有非常显著性,细胞周期分析出现程度不同的细胞周期阻滞;与对照组比较,20、40和60μmol/L的EGCG上调p38MAPK(增高百分比分别为37.3%、48.8%及96.7%)及Caspase-8 (增高百分比分别为2.0%、34.9%及43.1%)的mRNA表达和磷酸化的p38MAPK(增高百分比分别为5.48%、7.65%及7.05%)及Caspase-8(增高百分比分别为7.71%、16.2%及14.4%)蛋白的水平,与对照组统计学比较,其差异有非常显著性。结论EGCG处理HepG2细胞24h,促进p38MAPK磷酸化激活了外源性死亡受体途径,诱导HepG2细胞凋亡。
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